牛磺酸調節(jié)cAMP-PKA-CREB信號通路活性促進生長受限胎鼠神經干細胞增殖的體內外實驗研究.pdf

1、目的：宮內生長受限(Intrauterine growth restriction，IUGR)是指各種因素致胎兒在宮內的生長受到限制，不能發(fā)揮最佳潛能，出生體重明顯低于正常。母親、胎兒以及胎盤等方面的多種病理因素均可導致IUGR的發(fā)生。IUGR可導致多臟器功能受累，對腦發(fā)育的不良影響尤為突出，嚴重影響遠期神經功能。?；撬嵩谀X發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用，但機體自身合成較少，胎兒依靠胎盤轉運獲取足夠的?；撬?。本課題組前期的實驗研究顯示:孕鼠補充

2、?；撬峥筛纳艻UGR鼠腦發(fā)育，如改善腦超微結構、增加神經細胞數量等，這些作用可能是通過調節(jié)cAMP-PKA-CREB信號通路活性實現的。?；撬峥烧{節(jié)神經干細胞(Neural Stem Cells，NSC)的增殖、存活、粘附能力，但?；撬釋UGR胎鼠NSC增殖的影響以及機制尚未清楚。因此，本研究將通過體內外實驗探討IUGR對胎鼠NSC增殖的影響、產前補充?；撬釋UGR胎鼠NSC增殖的影響以及牛磺酸調節(jié)IUGR胎鼠NSC增殖的可能機制。

3、
　　方法:采用全程限制飲食的方法建立IUGR模型，即IUGR組孕鼠自受孕之日起僅給予對照組正常飲食的40％量喂養(yǎng);體內實驗分對照組、IUGR組、?；撬峤M（IUGR孕鼠自孕7天起加300mg/kg/d牛磺酸)，自然分娩后稱取體重及腦重;免疫組織化學染色法、RT-PCR、Western Blot的方法檢測各組腦組織內NSC數量以及cAMP-PKA-CREB信號通路關鍵因子(PKA，cAMP,CREB，p-CREB，BDNF,GDNF

4、,c-fos，c-jun，CaMKⅡ)的表達;體外分離對照組及IUGR組胎鼠NSC，免疫熒光細胞化學染色法檢測細胞FABP-7和Nestin的表達，CCK8試驗以及細胞計數法檢測不同濃度?；撬釋UGR胎鼠NSC增殖的影響，RT-PCR方法檢測不同濃度牛磺酸以及信號通路抑制劑H89處理NSC后各組cAMP-PKA-CREB信號通路關鍵因子的表達。SPSS20.0軟件對數據進行統計。
　　結果:全程限制飲食的方法可成功建立IUGR新

5、生鼠以及胎鼠模型;孕鼠補充牛磺酸可明顯降低IUGR的發(fā)生，減少死亡率，使腦重增加;IUGR組胎鼠腦內NSC的數量明顯減少，補充牛磺酸后IUGR組NSC數量明顯增加(P＜0.05);IUGR胎鼠腦內cAMP-PKA-CREB信號通路關鍵因子的表達與對照組相比有顯著差異，牛磺酸組關鍵因子的表達較IUGR組明顯改變，差異有統計學意義(P＜0.05)。IUGR胎鼠NSC體外增殖能力及細胞數量明顯降低，牛磺酸體外干預可使IUGR胎鼠NSC增殖能力

6、明顯增加，且與濃度有關(P＜0.05);IUGR胎鼠NSC體外培養(yǎng)條件下cAMP-PKA-CREB信號通路關鍵因子的表達受到抑制，部分因子呈代償性增加，與對照組相比有明顯差異，牛磺酸干預后相關因子的表達發(fā)生明顯變化，差異有有統計學意義(P＜0.05)。
　　結論:IUGR胎鼠腦內NSC數量減少，孕鼠補充?；撬岷驣UGR胎鼠NSC數量增加;IUGR胎鼠NSC體外增殖能力降低，牛磺酸可促進IUGR胎鼠NSC體外增殖;?；撬峥赡芡ㄟ^上調