黃芩素抑制人巨細胞病毒IE86表達機制的實驗研究.pdf

1、目的：⑴實驗研究觀察黃芩素（baicalein，BAI）對人巨細胞病毒（HCMV）體外感染人星形膠質細胞引起的病毒IE啟動子區(qū)域組蛋白乙酰化水平的表達變化及人星形膠質細胞和病毒的microRNAs表達變化的影響。⑵探討黃芩素抑制HCMV IE86表達的機制，進一步研究中藥黃芩抗HCMV感染的機制
　　方法：①人原代星形膠質細胞的培養(yǎng)和病毒感染；培養(yǎng)人原代神經干細胞，分化而得人原代星型膠質細胞，傳代至3-4代時感染一定滴度的人巨細胞

2、病毒。②利用原代人胚肺成纖維細胞來擴增HCMV（AD169）株病毒并確定病毒的滴度。③熒光定量PCR法檢測不同組（HCMV組、HCMV+BAI組、BAI+HCMV組）星型膠質細胞中病毒IE mRNA的表達變化。④運用染色質免疫共沉淀技術檢測BAI組、HCMV組、HCMV+BAI組、BAI+HCMV組和對照組之間HCMV IE-86啟動子區(qū)域組蛋白乙?；降谋磉_。⑤Real-Time PCR檢測BAI組、HCMV組、HCMV+BAI組、

3、BAI+HCMV組和對照組星形膠質細胞中microRNAs(hsa-miR-200)的表達變化。⑥熒光定量PCR法檢測不同組（HCMV組、HCMV+BAI組、BAI+HCMV組）星型膠質細胞中病毒microRNAs(miR-UL112-1)的表達變化。
　　結果：⑴HCMV感染人胚胎肺成纖維細胞96h左右，約超過80％的細胞出現典型的細胞病變效應(CPE)，呈典型的人巨細胞病毒感染后的細胞形態(tài)學的改變。空斑測定結果顯示病毒空斑形成

4、的單位為3.5×108pfu/mL。⑵Real-time PCR結果顯示：在感染48h和72h時HCMV+BAI組和BAI+HCMV組IE的mRNA表達明顯低于HCMV組（P<0.05）。⑶染色質免疫共沉淀實驗結果顯示：HCMV感染組可檢測到HCMV-MIEP的表達，與HCMV組相比較HCMV+BAI組、BAI+HCMV組的HCMV-MIEP的表達相對降低（P<0.05）。⑷Real-time PCR結果表明：HCMV+BAI組和BAI

5、+HCMV組microRNAs（miR-200b/c/429）的表達明顯高于HCMV組（P<0.05），且在病毒感染的24h表達量最高，48h表達量最低，72h表達量介于二者之間（P<0.05）。⑸Real-time PCR結果表明：HCMV+BAI組和BAI+HCMV組microRNAs（miR-200a/141）的表達明顯高于HCMV組（P<0.05），在病毒感染72h表達量最高。⑹熒光定量PCR檢測結果顯示：HCMV+BAI組和

6、BAI+HCMV組病毒自身的microRNAs(miR-UL112-1)的表達明顯高于HCMV組（P<0.05）。
　　結論：⑴一定濃度的黃芩素能夠抑制病毒啟動子區(qū)域組蛋白的乙酰化水平。⑵一定濃度的黃芩素能上調人原代星型膠質細胞中microRNAs(hsa-miR-200)的表達。⑶一定濃度的黃芩素能上調人巨細胞病毒microRNAs(miR-UL112-1)的表達。⑷一定濃度的黃芩素能降低人巨細胞病毒IE在人原代星型膠質細胞中的