冬蟲夏草水提物抗人巨細(xì)胞病毒研究.pdf

1、人巨細(xì)胞病毒是一種β-皰疹病毒，其在人群中具有較高的感染率，在普通人群中，均為隱性感染，無臨床癥狀，但是在免疫力低下患者中，如艾滋病患者、器官移植患者等特殊人群，人巨細(xì)胞病毒往往會被激活，從而導(dǎo)致臨床癥狀，比如視網(wǎng)膜炎、胸膜炎、發(fā)燒等。另外，人巨細(xì)胞病毒的隱性感染與胎兒致畸、結(jié)腸憩室炎、動脈硬化等密切相關(guān)。 目前FDA批準(zhǔn)的抗人巨細(xì)胞病毒藥物較少，且由于這些藥物具有腎毒性、造血抑制、病毒的抗藥性、以及低生物利用度等缺點(diǎn)，嚴(yán)重的限

2、制了臨床的使用。所以，有必要繼續(xù)尋找高效低毒的抗人巨細(xì)胞病毒藥物。 目的：冬蟲夏草是一種名貴的中草藥材，含有多種活性成份，比如，多糖、核苷、甘露糖等；具有多種生物活性，如提高免疫力、抗腫瘤、抗疲勞、降血糖、清除自由基等。 本研究擬探討冬蟲夏草用于抗人巨細(xì)胞病毒的可行性。 方法：首先制備本研究所用的宿主細(xì)胞、人巨細(xì)胞病毒、以及冬蟲夏草提取物；采用MTT法對提取物進(jìn)行細(xì)胞毒性測試，確定藥物對宿主細(xì)胞的無毒濃度；通過噬

3、斑減少試驗(yàn)確定藥物抗人巨細(xì)胞病毒活性，并確定其半數(shù)抑制量；通過免疫印跡以及對細(xì)胞活性的檢測，確定其潛在的抗人巨細(xì)胞病毒靶位。 結(jié)果：分離培養(yǎng)出了適于本研究用的宿主細(xì)胞-人包皮成纖維細(xì)胞；制備出高滴度人巨細(xì)胞病毒儲備液(2.4×106PFU/ml)；通過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)冬蟲夏草水提物濃度≤0.5mg/ml時，對細(xì)胞代謝不產(chǎn)生影響；通過噬斑減少試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草水提物可以有效抑制人巨細(xì)胞病毒的復(fù)制，其半數(shù)抑制量(IC50)為0.

4、17mg/ml；采用免疫印跡分析病毒蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)冬蟲夏草可以抑制IE2/UL84表達(dá)，削弱IE1表達(dá)；另外，冬蟲夏草水提物可以抑制因人巨細(xì)胞病毒感染引起的細(xì)胞活性升高。 結(jié)論：冬蟲夏草可以有效抑制人巨細(xì)胞病毒的復(fù)制，具有較強(qiáng)的抗人巨細(xì)胞病毒活性。研究中發(fā)現(xiàn)，其可以抑制IE2/UL84的表達(dá)，以及削弱IE1的表達(dá)。這些提示冬蟲夏草通過抑制這些蛋白的表達(dá)，從而達(dá)到抗人巨細(xì)胞病毒的活性。 另外，其他研究表明，抑制人巨細(xì)胞