新型單克隆抗體熒光探針染料的合成及免疫熒光組織化學應用.pdf

1、熒光探針在分子生物學、微生物學、生物化學、分析化學、化工和醫(yī)藥工業(yè)等領域有著廣泛地應用。同時它的發(fā)展與生命科學、化學、生物技術、診斷醫(yī)學等學科緊密相關。隨著相關技術的發(fā)展與普及，熒光探針的應用越來越廣泛，與此同時對熒光探針染料性能的要求也越來越高。熒光探針染料的合成與應用研究已發(fā)展成為生命科學和化學交叉的前沿研究領域。 熒光素具有高的消光系數(shù)，激發(fā)和發(fā)射波長都在可見光區(qū)，在水中具有較高的熒光量子產率，且無毒等優(yōu)點。另外還可以通過

2、對母體的修飾滿足不同使用條件(例如：最大吸收波長，最大發(fā)射波長，高的熒光量子產率等)的需要。所以該類熒光探針染料已廣泛的應用于生物活體內DNA的檢測和蛋白質標記復雜生物體系的研究等領域。 本論文圍繞新型熒光素基單克隆抗體熒光探針染料的設計、合成及免疫熒光組織化學應用展開，主要內容有以下幾個方面。 1.對熒光素前體2，5-二氯對二甲苯的合成條件進行了優(yōu)化。提出一種未見文獻報道制備2-5-二氯對二甲苯的新方法一微波促進合成法

3、，并對其合成條件進行了研究。對熒光素中間體3，6.二氯-1，2-4-苯三酸酐合成進行了研究，并對文獻報道方法進行了優(yōu)化改進。 2.設計并合成了2種未見文獻報道的熒光素類化合物4，7，4'，5'.四氯-5-羧基熒光素和4，7，4'，5'-四氯-6-羧基熒光素。對5(6）-羧基氯代熒光素的合成條件進行了優(yōu)化，并提出了一種有效的異構體混合物的分離方法，混和物經酯化、成鹽、重結晶，成功地進行了分離。對所有異構體結構都進行了表征。

4、 3.合成了4，7，2'，7'.四氯.5(6)-羧基熒光素并對5(6)-羧基異構體成功地進行了分離，首次報道了的4，7，2'，7'-四氯-5.羧基熒光素新戊酸酯的晶體結構。 4.合成了4種具有空間連接鏈的熒光素基單克隆抗體DNA熒光探針染料，其中2種未見文獻報道，并對其結構進行了表征。 5.合成了4種未見文獻報道的具有空間連接鏈的新型熒光素基單克隆抗體蛋白熒光標記探針染料，并對其結構進行了表征。 6.分別用新型單

5、克隆抗體熒光探針染料TET2477 acid及TET4457 acid對抗生蛋白鏈菌素單克隆抗體(免疫球蛋白G，IgG)進行標記，制備了單克隆抗體熒光探針。經過測定兩種熒光探針染料對抗體的取代度均在2～4之間，標記有效，取代度適中。用該單克隆熒光探針進行免疫反應，利用共聚焦熒光顯微成像技術得到了牛肺部動脈內皮細胞 - 微管蛋白及牛肺部內皮細胞肌動蛋白標記細胞圖像。對U20S(人體骨肉瘤上皮細胞)，Hela(人宮頸癌上皮細胞)用直接法進行