PRRSV NVDC-JXA1株膜基質(zhì)蛋白單克隆抗體的研制及冰凍切片免疫熒光技術(shù)快速檢測(cè)PRRSV抗原.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病為特征的傳染病。近幾年來我國(guó)大部分地區(qū)夏秋季出現(xiàn)豬的高熱病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部2007年確定引起高熱病的主要病原是豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株。目前，該病已是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的病毒性疫病之一。 本研究將純化的豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV) NVDC-JXA1株免疫6～8周齡BALB/c小鼠。應(yīng)用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，最后一次免疫后第

2、三天取其脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞在聚乙二醇作用下融合，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)篩選，得到2株穩(wěn)定分泌抗PRRSV NVDC-JXA1株特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，命名為1D12、5H5。經(jīng)鑒定其抗體亞型分別為IgG2b、IgM，兩株均為κ鏈，細(xì)胞上清ELISA效價(jià)1:103～1:104腹水ELISA效價(jià)可達(dá)1:105～1:107兩株單克隆抗體與豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒、豬乙腦病毒無交

3、叉反應(yīng)，與PRRSV VR-2332株有交叉反應(yīng)。免疫印跡(Western-blot)結(jié)果顯示，該兩株單抗是針對(duì)PRRSV NVDC-JXA1膜基質(zhì)蛋白的特異性McAb。 利用前期獲得的豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)單克隆抗體1D12作為一抗，建立了在冰凍切片中快速檢測(cè)PRRSV抗原的免疫熒光(IFA)方法。運(yùn)用該方法檢測(cè)豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒、豬乙腦病毒感染發(fā)病豬組織無特異性免疫熒光信號(hào)，而檢測(cè)P