生物質(zhì)譜技術(shù)在真菌源激活蛋白研究中的應(yīng)用.pdf

1、本研究運(yùn)用生物質(zhì)譜技術(shù)對真菌源的蛋白激發(fā)子進(jìn)行了鑒定與分析。該類蛋白激發(fā)子在交鏈孢菌(Alternariasp.)、紋枯病菌(Rhizoctoniasolani)、黃曲霉菌(Aspergillussp.)、葡萄孢菌(Botrytissp.)、稻瘟菌(Magnaporthegrisea)、青霉菌(Penicilliumsp.)、木霉菌(Trichodermasp.)、鐮刀菌(Fusariumsp.)等多種真菌都有發(fā)現(xiàn)，我們將其命名為激活蛋

2、白。該類蛋白的分離、純化和生物質(zhì)譜分析國內(nèi)外未見報(bào)道。本研究采用了MALDI-TOF，MALDI-TOF/TOF,microLC-ESI，nanoLC-ESI-IT-MS/MS等技術(shù)對Alternaria，Botrytis和Magnaporthe來源激活蛋白進(jìn)行了分離，純化，肽段序列測定和翻譯后修飾鑒定。 肽指紋圖譜(PMF)分析結(jié)果表明Alternaria來源激活蛋白是一類新的蛋白激發(fā)子。運(yùn)用從頭測序(denovosequen

3、cing)和串連質(zhì)譜(MS/MS)等方法建立了一套測定激活蛋白的序列的生物質(zhì)譜技術(shù)。測定了三種真菌來源激活蛋白部分肽段序列。 Alternaria來源的激活蛋白實(shí)現(xiàn)了微量蛋白的精確分子量測定，確定了均一化程度。在對來源于葡萄孢菌(Botrytis)激活蛋白的翻譯后修飾分析中發(fā)現(xiàn)其存在泛素化。泛素化是一類重要的蛋白翻譯后修飾，與蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)和降解調(diào)節(jié)有關(guān)。 序列分析發(fā)現(xiàn)來源于Alternaria和Botrytis的激活蛋白部分

4、序列與alpha-NAC蛋白中保守序列同源。alpha-NAC蛋白在新生多肽合成中起重要作用，還是重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。保守序列DIELVM在三維結(jié)構(gòu)上是alpha-螺旋。 對模式真菌Neurosporacrassa的蛋白組學(xué)研究鑒定了與結(jié)構(gòu)，代謝調(diào)控，信號傳導(dǎo)相關(guān)蛋白1467個。通過該研究，建立了蛋白組研究SDS-PAGE-nanoLC-ESI-IT-MS/MS研究體系，為下一步在蛋白組學(xué)層面研究激活蛋白及其與植物的相互作用打下