生物質(zhì)譜技術(shù)研究及其在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用.pdf

1、本研究包括兩方面的工作:納升噴霧裝置的研制及其在蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用和穩(wěn)定同位素化學(xué)標(biāo)記新方法的探討.放置金屬絲穿過玻璃噴頭中是一種提供電接觸的簡單方法,為了克服使用細(xì)金屬絲難于操作的局限,我們采用相對粗的金屬絲并將玻璃噴頭制作成一端帶有很長的玻璃絲以減緩分析液的噴霧流速.這一改進(jìn)的納升噴霧頭能長時間穩(wěn)定噴霧,噴霧流速80-120 nL/min.納升噴霧頭有很好的檢測靈敏度,30 min噴霧濃度為25 pg/μL利血平溶液其準(zhǔn)分子離子峰的

2、平均信噪比(S/N)為42.改進(jìn)的納升噴霧頭可用于分析標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液酶解及膠上酶解肽,消耗不足1微升樣品便可實施蛋白鑒定;還可分析實際蛋白樣品,選擇了7個由兩維凝膠電泳分離的人類U937細(xì)胞裂解液的蛋白質(zhì)點,其鑒定結(jié)果明顯好于相應(yīng)的LC/MS鑒定結(jié)果.同時,我們探討了在納升噴霧過程中添加一輔助電極對納升噴霧的影響,發(fā)現(xiàn)輔助電極的存在可顯著改善納升噴霧的信噪比,輔助電極存在下電場分布的模擬計算也支持了這一結(jié)果.基于金屬絲提供電接觸的納升噴

3、霧頭最大缺陷是難于和其它設(shè)備在線連接,為了彌補這一不足,我們制作一種噴霧裝置.此裝置借助于不銹鋼三通將玻璃噴頭和金屬絲有效的相連接,三通的其中一個入口作為氣體通路,允許氣體輔助樣品裝載.此裝置通過石英毛細(xì)管可于其它設(shè)備在線連接.在此裝置中金屬絲無須穿過玻璃噴頭,因而允許玻璃噴頭保持極小的噴霧口徑,這一安排使納升噴霧有更低的分析液流速30-60 nL/min和更高的檢測靈敏度,25 min噴霧濃度為25 pg/μL利血平溶液其準(zhǔn)分子離子峰

4、的平均信噪比(S/N)為179.濃度為1 ng/μL的肌紅蛋白和細(xì)胞色素C溶液酶解肽可進(jìn)行蛋白鑒定,濃度為5 ng/μL的細(xì)胞色素C可提供十分滿意的納升噴霧的質(zhì)譜圖.我們比較了酸性、中性和堿性介質(zhì)中蛋白溶液酶解肽噴霧的差異,此外將噴霧裝置與一注射泵連接用來監(jiān)測有機化學(xué)反應(yīng)的發(fā)生.穩(wěn)定同位素化學(xué)標(biāo)記新方法的探討致力尋找簡單、有效的同位素化學(xué)標(biāo)記方法.我們改進(jìn)了傳統(tǒng)的氨基酸/肽季銨化方法,用碳酸銀替代碳酸氫鉀催化季銨化反應(yīng)的發(fā)生.改進(jìn)的季銨