熱休克蛋白47與喉鱗狀細胞癌臨床預后相關性研究.pdf

1、目的:
　　研究喉鱗狀細胞癌(LSCC)患者熱休克蛋白47(HSP47)的表達情況，分析其與腫瘤形成及其臨床預后的相關性，并深入探討其潛在的作用機制。
　　方法:
　　共收集71例LSCC患者標本，記錄并完善臨床相關統(tǒng)計資料。用蛋白免疫印跡法和免疫組化法檢測HSP47在LSCC組織及癌旁組織中的表達。通過生存曲線分析，分析HSP47與LSCC的臨床預后相關性。為進一步明確HSP47在細胞活性、腫瘤侵襲以及細胞凋亡等方面

2、所起的作用，我們應用質粒以及小干擾RNA(siRNA)對Hep-2細胞進行體外實驗。采用CCK-8法來評估Hep-2細胞的增殖能力及對藥物的敏感性;應用細胞劃痕和transwell實驗分別來分析Hep-2細胞的遷移和侵襲能力;此外，應用流式細胞術來分析細胞周期凋亡，通過蛋白免疫印跡法來檢測熱休克蛋白47對凋亡相關蛋白表達的影響。
　　結果:
　　蛋白質免疫印跡及免疫組化結果顯示，HSP47在LSCC組織中的表達明顯低于癌旁組

3、織，其低表達與喉癌的不良預后顯著相關。同時，在免疫組化中，HSP47的表達量隨著病理級別的降低而降低。細胞活性實驗顯示，Hep-2細胞在轉染質粒HSP47后，其生長出現了明顯的抑制。在轉染96小時后，與對照組相比，細胞活性減少了8.7％。相反地，在轉染si-HSP4796小時后，Hep-2細胞株活性提高了4％。細胞劃痕實驗顯示，上調HSP47的表達，能有效抑制Hep-2細胞的遷移，與對照組相比，Hep-2細胞遷移能力下降了約20％(P＜

4、0.05)。同樣地，細胞transwell實驗顯示，上調HSP47的表達可顯著抑制Hep-2細胞的侵襲能力，與對照組相比，Hep-2細胞侵襲能力下降了30％(P＜0.05)。此外，上調HSP47的表達，顯著增加了Hep-2細胞對順鉑藥物的敏感性。用藥48小時后，Hep-2細胞的藥物敏感性增加了26.5％。相反地，沉默HSP47，大大地增加了Hep-2細胞對順鉑藥物的抵抗性，用藥48小時后，藥物敏感性降低了16.5％。流式實驗顯示，上調H

5、SP47的表達后，Hep-2細胞可有效地被阻滯在G1期。與對照組相比，G1期阻滯增加了5.11％(P＜0.05)。與此同時，上調HSP47后，早期凋亡細胞與對照組相比增加了8.19％(P＜0.05)。最后，通過對凋亡相關蛋白的檢測我們發(fā)現，在轉染質粒HSP47后，與對照組相比，除了Bcl-2表達下調外，Bax、PARP、caspase-7、caspase-8、caspase-9均表現出不同程度地上調。
　　結論:
　　研究表