大容量肺灌洗對(duì)家兔肺泡上皮claudin-4和E-cadherin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察大容量肺灌洗(whole lung lavage，WLL)對(duì)家兔肺泡上皮緊密連接蛋白(claudin-4)和E-鈣粘蛋白(E-cadherin)表達(dá)的影響，探討WLL相關(guān)性肺損傷的修復(fù)機(jī)制。
　　方法：將15只家兔隨機(jī)分為對(duì)照組、大容量肺灌洗后2小時(shí)組（肺灌洗2h組）、大容量肺灌洗后72小時(shí)組（肺灌洗72h組），每組5只。行WLL前各組家兔均禁食12h，禁飲6h。肺灌洗2h組和肺灌洗72h組家兔耳緣靜脈注入3％戊巴比妥(

2、1mL/kg)，待進(jìn)入全麻狀態(tài)后行氣管切開(kāi)，插入氣管插管導(dǎo)管，確保左、右肺分隔良好，左肺給予氧氣吸入，氧流量控制在160～200mL/min，生理鹽水（溫度約37℃）反復(fù)灌洗右肺，灌洗總量按25～30mL/kg計(jì)算，每次灌入約10mL，生理鹽水沿灌洗導(dǎo)管注入(速度約5mL/min)，每次注入完畢后將家兔處于頭低足高位，讓灌洗液自然引流干凈，重復(fù)上述操作，灌洗液回收率均在90％以上，后拔出氣管插管，逐層縫合，術(shù)后常規(guī)處理，肺灌洗72h組家

3、兔清醒后可逐漸恢復(fù)正常飲食。對(duì)照組家兔進(jìn)入全麻狀態(tài)后行氣管切開(kāi)，插入氣管插管導(dǎo)管，確保左、右肺分隔良好，左肺給予氧氣吸入，氧流量控制在160～200mL/min，右肺不予以灌洗。對(duì)照組家兔經(jīng)以上操作后2小時(shí)行肺部CT檢查，后股動(dòng)脈放血處死家兔;肺灌洗2h組和肺灌洗72h組分別于設(shè)定時(shí)間點(diǎn)前15min再次麻醉家兔，行肺部CT檢查后股動(dòng)脈放血處死家兔。測(cè)量右肺濕/干重比，取部份右肺組織行石蠟切片，HE染色觀察肺組織的病理改變并進(jìn)行評(píng)分;電鏡

4、觀察肺泡上皮的超微結(jié)構(gòu);免疫組化檢測(cè)肺組織claudin-4及E-cadherin的表達(dá)，其相對(duì)表達(dá)量用平均光密度值(OD值)表示。
　　結(jié)果：⑴家兔表現(xiàn):肺灌洗2h組及肺灌洗72h組家兔大容量肺灌洗時(shí)出現(xiàn)呼吸急促，唇鼻部皮膚發(fā)紺明顯，偶有嗆咳等不適反應(yīng)，術(shù)畢后上述癥狀逐漸消失，肺灌洗72h組術(shù)后清醒后飲食、活動(dòng)無(wú)明顯異常;對(duì)照組家兔無(wú)上述反應(yīng)。⑵家兔肺部CT改變:肺灌洗2h組家兔左側(cè)肺組織未見(jiàn)明顯異常，但右肺組織見(jiàn)不均勻磨玻璃樣

5、浸潤(rùn)影;對(duì)照組和肺灌洗72h組家兔雙肺組織肺部CT檢查未見(jiàn)明顯異常改變。⑶肺組織的大體表現(xiàn):肺灌洗2h組家兔右肺組織體積增大，彈性減退，部份色澤暗紅，表面可見(jiàn)散在出血點(diǎn)，切面可見(jiàn)少量泡沫狀液體流出，左側(cè)肺組織未見(jiàn)明顯異常;肺灌洗72h組及對(duì)照組兩側(cè)肺組織表面光滑，彈性好，無(wú)明顯出血點(diǎn)及水腫。⑷肺濕/干重比(W/D):與對(duì)照組肺W/D值(4.34±0.06)比較，肺灌洗2h組的肺W/D值(4.72±0.09)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、＜0.05);與肺灌洗2h組比較，肺灌洗72h組的肺W/D值(4.36±0.07)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);肺灌洗72h組W/D值較對(duì)照組高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。⑸HE染色:肺灌洗2h組家兔肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔增厚、局灶性肺水腫，肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)淡紅色液體，但肺組織結(jié)構(gòu)完整;肺灌洗72h組家兔肺組織病理改變較肺灌洗2h組減輕，肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔內(nèi)無(wú)滲液，但仍有少許炎癥細(xì)胞

7、浸潤(rùn)，對(duì)照組家兔HE染色未見(jiàn)明顯異常改變。肺灌洗2h組的病理評(píng)分(5.0±0.7)明顯高于對(duì)照組（0.2±0.4）和肺灌洗72h組（1.2±0.4），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05）;肺灌洗72h組病理評(píng)分較對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。⑹電鏡顯示:對(duì)照組肺泡上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)完整;肺灌洗2h組細(xì)胞間緊密連接有破壞，細(xì)胞間隙增寬，部分Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞斷裂;肺灌洗72h組上述改變減輕。⑺免疫組織化學(xué):對(duì)照組家兔clau

8、din-4及E-cadherin主要在肺泡上皮細(xì)胞包膜呈連續(xù)的陽(yáng)性表達(dá)，包漿有少許表達(dá);肺灌洗2h組肺泡上皮細(xì)胞claudin-4及E-cadherin的表達(dá)均明顯低于對(duì)照組，為不連續(xù)表達(dá);肺灌洗72h組claudin-4及E-cadherin表達(dá)較肺灌洗2h組增強(qiáng)，但仍低于對(duì)照組。肺灌洗2h組claudin-4及E-cadherin表達(dá)的OD值分別為(0.93±0.12)、(1.12±0.09)，較對(duì)照組claudin-4及E-cad

9、herin表達(dá)的OD值(1.44±0.05)、(1.74±0.05)及肺灌洗72h組claudin-4及E-cadherin表達(dá)的OD值(1.32±0.04)、(1.62±0.07)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;與對(duì)照組比較，肺灌洗72h組claudin-4及E-cadherin表達(dá)的OD值仍有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：①大容量肺灌洗可導(dǎo)致家兔肺泡上皮屏障一定程度的損傷。②大容量肺灌洗后家