P-ERK參與調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后Nrf2信號通路表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:創(chuàng)傷性腦損傷伴隨著嚴(yán)重的一次直接損害和繼發(fā)的二次損害,二次損害中氧化應(yīng)激會導(dǎo)致線粒體功能異常,脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)斷裂,蛋白質(zhì)過氧化,脂質(zhì)過氧化反應(yīng)等,進(jìn)一步加重神經(jīng)元凋亡,而星形膠質(zhì)細(xì)胞在抵抗氧化應(yīng)激的過程中起著重要的作用。核因子E2相關(guān)因子(Nucleus factor E2-relatedfactor,Nrf2)是內(nèi)源性啟動抗氧化基因的重要信號通路,氧化應(yīng)激的條件下可調(diào)節(jié)二相解毒

2、酶如血紅素加氧酶(heme oxygenase,HO-1),超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)等的生成,從而起到抵抗氧化應(yīng)激的作用。細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal-regulated kinases,ERK)信號通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖,分化的重要通路,其在細(xì)胞氧化應(yīng)激中也起著重要作用,但是其對于星形膠質(zhì)細(xì)胞Nrf2信號通路的作用還不太明確。中樞神經(jīng)系統(tǒng)中Nrf2信號通路主要通過在星形膠

3、質(zhì)細(xì)胞中激活,調(diào)節(jié)解毒酶的表達(dá)從而對神經(jīng)元起到保護作用。本研究在體外環(huán)境中探討星形膠質(zhì)細(xì)胞劃痕損傷后,活化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶即磷酸化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(Phosphorylation Extracellular signal-regulated kinases,P-ERK)是否參與了Nrf2信號通路調(diào)節(jié)。
  研究方法:取昆明小鼠乳鼠大腦皮質(zhì),進(jìn)行原代星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞融合后,用10ul移液管吸頭進(jìn)行細(xì)胞劃痕損傷實驗。用Weste

4、rn Blot,免疫熒光檢測損傷后P-ERK,Nrf2,以及其下游蛋白HO-1的表達(dá)情況。并使用Nrf2激動劑萊菔硫烷后,檢測HO-1表達(dá)。為了探討P-ERK在劃痕損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用,劃痕前在星形膠質(zhì)培養(yǎng)基中加入P-ERK抑制劑U0126,后用Western Blot和免疫熒光檢測P-ERK,Nrf2和HO-1的表達(dá)情況。
  結(jié)果:在未處理的空白對照組中Nrf2僅在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),劃痕損傷后Nrf2在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)

5、,星形膠質(zhì)細(xì)胞劃痕損傷后Nrf2信號通路活化。Western blot結(jié)果顯示,與空白對照組相比HO-1在細(xì)胞劃痕損傷后6h,12h,24h,48h表達(dá)先增高后降低(P<0.05),與此同時細(xì)胞劃痕后ERK活化,P-ERK表達(dá)增加。免疫熒光與Western blot結(jié)果表明細(xì)胞劃痕前使用U0126處理后P-ERK表達(dá)與細(xì)胞劃痕組相比表達(dá)明顯降低(P<0.05),HO-1的表達(dá)量與單純損傷組相比明顯降低(P<0.05)U0126抑制了細(xì)胞

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