調(diào)控S1P1受體信號(hào)通路對(duì)糖氧剝后星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　觀察鞘氨醇1-磷酸1型受體（The sphingosine1-phosphate receptor，S1P1R）抑制劑W146對(duì)糖氧剝奪（Oxygen-glucose deprivation,OGD）后星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖能力的影響。
　　方法：
　　取出生后3天內(nèi)SD（Sprague-Dawley）乳鼠大腦皮層組織進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)。取第三代細(xì)胞予以免疫熒光鑒定其純度后進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)步驟。采用免疫熒光雙標(biāo)

2、法檢測(cè)S1P1R在星形膠質(zhì)細(xì)胞上的表達(dá)。將接種于培養(yǎng)皿中的細(xì)胞隨機(jī)分為3組：CONTROL組、OGD/R組以及OGD/R+W146組。OGD處理細(xì)胞2小時(shí)模擬缺氧環(huán)境建立星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧模型，恢復(fù)糖氧供應(yīng)時(shí)CONTROL組細(xì)胞予以普通培養(yǎng)基、OGD/R組細(xì)胞予以培養(yǎng)基+等濃度藥物溶劑（無水乙醇）、OGD/R+W146組細(xì)胞予以培養(yǎng)基+W146（10uM）?；謴?fù)糖氧供應(yīng)后3h、6h、12h以及24h時(shí)間點(diǎn)行EDU、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)處于增殖期

3、（S期）細(xì)胞比率；恢復(fù)糖氧供應(yīng)后12h、24h、48h、72h時(shí)點(diǎn)，行噻唑藍(lán)（MTT）檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖活性；蛋白免疫印跡法檢測(cè)S1P1R蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　S1P1R在星形膠質(zhì)細(xì)胞上有表達(dá)。OGD后星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖能力升高：與CONTROL組相比，OGD組細(xì)胞增殖活性顯著增加（P<0.05），處于S期細(xì)胞比率明顯增加，S1P1R蛋白表達(dá)水平上調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（6h和12h，P<0.05）。與OGD/R組相比，