lncRNA-MALAT1調(diào)控ERK-MAPK信號通路抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖和侵襲的實驗研究.pdf

1、方法：
　?。?）我們收集了蘇州大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科2010年3月至2013年4月手術切除的膠質(zhì)瘤組織標本132例及非瘤腦組織20例，通過實時熒光定量PCR檢測比較了lncRNA-MALAT1在膠質(zhì)瘤組織及非瘤腦組織中的表達水平；
　?。?）以慢病毒為載體，在膠質(zhì)瘤細胞株U87和U251中上調(diào)或下調(diào)MALAT1的表達水平；
　?。?）在膠質(zhì)瘤細胞株中改變MALAT1的表達水平后，采用CCK-8試驗、免疫組化檢測ki

2、-67表達水平、流式細胞周期檢測來評估MALAT1表達改變對膠質(zhì)瘤細胞增殖能力的影響；采用Transwell實驗、明膠酶譜實驗評估MALAT1表達改變對膠質(zhì)瘤細胞侵襲能力的影響；同時，采用western blotting檢測MMP2、MMP9等與侵襲相關蛋白的表達水平。
　?。?）將過表達MALAT1的U87細胞株及其陰性對照組在裸鼠皮下接種，比較成瘤組織的大??；同時將上述倆組細胞在裸鼠顱內(nèi)接種，通過免疫組化檢測ki-67及MMP

3、2的表達水平，以評估MALAT1過表達對腫瘤增殖、侵襲能力的影響，并且我們進一步統(tǒng)計了顱內(nèi)接種裸鼠的生存曲線。
　?。?）提取過表達及低表達MALAT1的U87、U251細胞的蛋白，通過western blotting，在腫瘤相關的信號通路中篩選出MALAT1異常表達后影響最明顯的一條通路。
　　結(jié)果：
　?。?）qRT-PCR結(jié)果顯示：lncRNA-MALAT1在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達顯著低于非瘤腦組織，其結(jié)果具有統(tǒng)

4、計學意義（P<0.01）；在不同級別的膠質(zhì)瘤組織中表達無顯著差異(P>0.05)。
　?。?）CCK-8實驗、免疫組化檢測 ki-67表達實驗、流式細胞周期檢測實驗的結(jié)果表明低表達MALAT1能促進膠質(zhì)瘤細胞的增殖，而過表達MALAT1能抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖；Transwell實驗及明膠酶譜實驗結(jié)果表明低表達 MALAT1促進膠質(zhì)瘤細胞株的侵襲，反之亦反；western blotting結(jié)果顯示，在膠質(zhì)瘤細胞株中MALAT1的異常

5、表達主要影響的侵襲相關蛋白是MMP2。
　?。?）體內(nèi)實驗中，MALAT1過表達使裸鼠皮下成瘤組織生長減緩，使裸鼠顱內(nèi)成瘤組織ki-67及MMP2表達水平降低。同時，MALAT1過表達的U87細胞株接種于裸鼠顱內(nèi)后其生存時間較其陰性對照組延長。
　?。?）western blotting結(jié)果顯示：在膠質(zhì)瘤細胞株中，MALAT1的異常表達對ERK/MAPK信號通路影響最顯著，其主要是通過影響該信號通路中P-ERK的表達水平來調(diào)