Bex2抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及其與JNK-MAPK通路關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究Bex2對(duì)U251神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響并探討其作用機(jī)制;檢測(cè)神經(jīng)膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本中Bex2及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),并分析它們間的相關(guān)關(guān)系,為膠質(zhì)瘤的基因治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:1.以正常人腦組織總RNA為模板,采用RT-PCR法獲得Bex2的cDNA,并與pEGFP-N1載體連接,構(gòu)建pEGFP-N1-Bex2真核表達(dá)載體。2.在U251神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中,用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法過表達(dá)Bex2,分別于轉(zhuǎn)染后12h、

2、24h、48h、72h收集細(xì)胞。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,用免疫印跡法檢測(cè)Bex2基因的表達(dá)、cleaved caspase-3、p-JNK、p-c-Jun的變化。3.收集臨床神經(jīng)膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本,通過免疫組化檢測(cè)Bex2、cleaved caspase-3、p-JNK、p-c-Jun蛋白的表達(dá),并與正常腦組織比較,分析它們間的相關(guān)關(guān)系。
　　 結(jié)果:1.成功構(gòu)建pEGFP-N1-Bex2真核表達(dá)質(zhì)粒。2.Bex2基因在轉(zhuǎn)染U2

3、51神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞后12h即有表達(dá),48h達(dá)到高峰,以后逐漸下降。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,過表達(dá)Bex2后12h、24h、48h、72h各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞凋亡率明顯低于空載體對(duì)照組(P＜0.05);轉(zhuǎn)染48h組低于其他時(shí)間點(diǎn)組(P＜0.05)。4.免疫印跡法檢測(cè)表明,轉(zhuǎn)染后48h細(xì)胞的cleaved caspase-3、p-JNK、p-c-Jun含量較空載體組和空白對(duì)照組降低(P＜0.05)。5.免疫組化結(jié)果表明,神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織較正常腦組