神經(jīng)肽P物質(zhì)調(diào)控Notch-Delta信號通路對高氧肺損傷Ⅱ型上皮細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、第一部分肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定以及細(xì)胞高氧損傷模型的建立
　　目的：成功進(jìn)行原代AECⅡ的培養(yǎng)和鑒定，并成功建立高氧肺損傷的細(xì)胞模型，為下一步的實驗打下基礎(chǔ)。
　　方法：取懷孕18天的Sprague-Dawley（SD）大鼠采用本實驗室原創(chuàng)的差速離心和差速貼壁的原代AECⅡ的培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)。采用本實驗室自主研發(fā)的密閉高氧裝置通入95％的氧氣對AECII進(jìn)行高氧模型的建立。光鏡和透射電鏡及免疫熒光技術(shù)分別對正常及高氧處

2、理的AECⅡ的形態(tài)、數(shù)目及表面特異性蛋白C（SP-C）的表達(dá)進(jìn)行觀察及檢測。
　　結(jié)果：正常培養(yǎng)的AECⅡ光鏡下外形為多邊形島狀分布，細(xì)胞間緊密連接且胞核明顯、胞漿有大量顆粒性物質(zhì)；透射電鏡下胞膜可見微絨毛，胞內(nèi)可見大量嗜餓性板層小體。免疫熒光可見SP-C的大量表達(dá)。而經(jīng)高氧處理的AECⅡ光鏡下胞間裂隙增大且胞核分裂；透射電鏡下可見微絨毛部分消失，胞內(nèi)出現(xiàn)脂肪空泡。免疫熒光可見SP-C微弱表達(dá)。
　　結(jié)論：AECⅡ的生長正常

3、可達(dá)到實驗所需條件，高氧干預(yù)的模型建立可達(dá)到預(yù)期目的，可進(jìn)行后續(xù)實驗。
　　第二部分神經(jīng)肽P物質(zhì)調(diào)控Notch/Delta信號通路對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增殖的影響
　　目的：探討神經(jīng)肽P物質(zhì)(substance P,SP）調(diào)控Notch/Delta信號對胎鼠高氧肺損傷后肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（AECⅡ）增殖的影響。
　　方法：將孕19天的SD大鼠剖宮產(chǎn)后取其胎鼠肺組織進(jìn)行原代AECII分離培養(yǎng)。原代AECII隨機(jī)分為6組，分別給

4、于空氣（氧體積分?jǐn)?shù)為21%）、高氧（氧體積分?jǐn)?shù)為95%）、神經(jīng)肽P物質(zhì)(substance P,SP）、SP受體拮抗劑（L703.606）；Notch通路阻斷劑(MW167)干預(yù)。干預(yù)后光鏡下觀察各組細(xì)胞增殖狀況；計數(shù)干預(yù)后6h、12h、18h、24h時間點(diǎn)細(xì)胞個數(shù)；CCK8法檢測各組細(xì)胞存活率；流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞的周期表達(dá)；實時熒光定量PCR檢測各組配體Dll1和Dll4以及靶基因Hes1mRNA的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：與空