Delta4、Notch2、Notch4在早產(chǎn)大鼠高氧肺損傷中作用機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分Delta4、Notch2、Notch4在早期大鼠肺發(fā)育過(guò)程中的作用 目的:研究Delta4及其受體Notch2、Notch4在早產(chǎn)大鼠肺發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)，探討Delta4及Notch2、Notch4在肺發(fā)育過(guò)程中的作用。 方法:取孕18d、20d、21d胎鼠和孕21d早產(chǎn)鼠(足月為22d)生后1d、7d、14d和21d肺組織標(biāo)本(n=8)，HE染色進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察、免疫組化法和半定量RT-PCR法檢測(cè)Delt

2、a4及Notch2、Notch4的表達(dá)。 結(jié)果：1.孕齡18d胎肺見(jiàn)支氣管樹(shù)分支形成，間質(zhì)中毛細(xì)血管毗鄰氣道分布；20d至早產(chǎn)生后1d時(shí)，肺組織基本結(jié)構(gòu)為終末囊泡，上皮分隔進(jìn)一步發(fā)展，間質(zhì)減少，毗鄰上皮的毛細(xì)血管增多；7d、14d肺泡數(shù)目增多并漸漸成熟，氣血屏障變?。?1d肺泡壁進(jìn)一步變薄，間質(zhì)細(xì)胞少見(jiàn)。2.免疫組化結(jié)果顯示：Delta4在A18天表達(dá)最豐富，后表達(dá)呈下降趨勢(shì)；Notch2在孕18d、20d即有表達(dá)，21d表達(dá)最

3、強(qiáng)，出生后表達(dá)逐漸減弱；Notch4在孕18d表達(dá)最明顯，以后呈減弱趨勢(shì)。3.RT-PCR檢測(cè)Notch2、Notch4mRNA變化與多肽變化規(guī)律相似。 結(jié)論：Delta4及Notch2、Notch4參與大鼠早期肺發(fā)育過(guò)程。 第二部分85％高氧對(duì)早產(chǎn)大鼠肺Delta4、Notch2、Notch4影響 目的:研究高濃度氧對(duì)早產(chǎn)大鼠肺發(fā)育過(guò)程N(yùn)otch信號(hào)配體Delta4和受體Notch2、Notch4表達(dá)的影響，探

4、討它們?cè)诟哐醴螕p傷中的作用機(jī)制。 方法:受孕SD母鼠孕21d剖宮產(chǎn)娩出新生大鼠隨即分為Ⅰ組空氣組和Ⅱ組高氧組。Ⅱ組置于氧箱中，氧濃度約85％，溫度25-26℃，濕度60-70％，二氧化碳濃度＜0.5％。Ⅰ組置于同一室內(nèi)常壓空氣中。Ⅱ組暴露于高氧中足1、7、14、21d，分別在Ⅰ、Ⅱ組隨機(jī)各取動(dòng)物8只處死后取肺標(biāo)本，左肺行Delta4和Notch2、Notch4免組化切片用，右肺凍存液氮做Delta4和Notch2、Notch4及

5、β-actin的RT-PCR用。 結(jié)果：1.高氧組1d時(shí)肺組織未見(jiàn)明顯病變，7、14d時(shí)見(jiàn)血管減少，結(jié)構(gòu)紊亂；14、21d時(shí)肺泡形成明顯滯后，即典型小直徑肺泡數(shù)目較對(duì)照組顯著減少，肺泡結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單化和囊泡化，斷裂融合，終末氣道多為較大的囊泡，血管明顯減少，結(jié)構(gòu)不完整，與受損肺泡無(wú)伴行關(guān)系，間質(zhì)纖維增生，肺泡壁增厚。2.染色陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色顆粒，定位于胞膜。Delta4特異性表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞，高氧組表達(dá)增強(qiáng)，Delta4在1d表達(dá)稍降低

6、，在7、14d時(shí)間點(diǎn)表達(dá)增加，21d表達(dá)再次降低，在7、14d表達(dá)較對(duì)照組有顯著性差異(p＜0.05)；3.Notch2較均勻表達(dá)在上皮、內(nèi)皮和成纖維細(xì)胞，高氧組Notch2表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)呈下降趨勢(shì)，在1、7、14d較對(duì)照組降低顯著性差異(p＜0.05)Notch4特異性表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞，高氧組表達(dá)增強(qiáng)，Notch4在1d表達(dá)稍降低，在7、14d時(shí)間點(diǎn)表達(dá)增加，21d表達(dá)再次降低，在7、14d表達(dá)較對(duì)照組有顯著性差異(p＜0.05)；4.