Notch-Dll4在激光誘導(dǎo)的大鼠脈絡(luò)膜新生血管中的作用.pdf

1、【研究背景】脈絡(luò)膜新生血管（CNV）是許多視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜疾病的共同病理表現(xiàn)，常見CNV疾病包括年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）、特發(fā)性脈絡(luò)膜新生血管、眼組織胞漿菌病綜合征（POHS），以及眼底血管樣條紋（AS）、病理性近視和外傷性脈絡(luò)膜破裂等。新生血管從脈絡(luò)膜長出后突破Bruch膜后長入視網(wǎng)膜色素上皮下間隙或神經(jīng)上皮下，由于新生血管是不成熟的，易發(fā)生出血和滲漏等改變，繼而形成瘢痕，造成局部損傷，這些損傷好發(fā)于黃斑區(qū)，對(duì)中心視力影響較大，因此

2、CNV是造成視力喪失的重要原因之一。CNV的發(fā)生和發(fā)展是復(fù)雜的過程，受多種因素和因子精細(xì)而敏感的調(diào)控。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前已知的最強(qiáng)促血管生成因子，能夠誘導(dǎo)新生血管生成并使血管通透性增高?？筕EGF治療也是目前主流的CNV治療方式。本研究組已證實(shí)Notch信號(hào)通路同樣在CNV的生成中起重要作用，Notch信號(hào)通路中的Delta樣配體4（Dll4）基因是除VEGF外目前發(fā)現(xiàn)的另一可因半劑量等位基因缺失而使動(dòng)物在胚胎時(shí)期死亡的

3、基因，Dll4在血管的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。探討Dll4在CNV的發(fā)生中可能的作用及其機(jī)制，可以為臨床防治CNV相關(guān)疾病提供新的思路。
　　【目的】探討Notch信號(hào)通路中Dll4在激光誘導(dǎo)的大鼠脈絡(luò)膜新生血管生成中的作用機(jī)制。
　　【方法】將120只BN大鼠隨機(jī)分為正常組（18只）、光凝組（54只）、光凝后實(shí)驗(yàn)組（24只）和光凝后對(duì)照組（24只）。532nm激光誘導(dǎo)建立雙眼CNV模型。實(shí)驗(yàn)組在光凝后立刻玻璃體內(nèi)注射25mg

4、.mL-1的VEGF抗體Avastin10μL，對(duì)照組在光凝后注射0.01mmol.L-1PBS10μL。采用免疫熒光染色法檢測7d時(shí)Dll4和VEGF在正常組（6只）和光凝組（6只）CNV中的表達(dá)。采用Western-blotting和RT-PCR方法檢測正常組（12只）和光凝后1d（12只）、3d（12只）、7d（12只）和14d（12只）組CNV中Dll4和VEGF的蛋白和mRNA表達(dá)趨勢。7d時(shí)采用Westernblotting

5、和RT-PCR檢測實(shí)驗(yàn)組（12只）和對(duì)照組（12只）CNV中Dll4和VEGF蛋白及mRNA表達(dá)含量的差異，14d時(shí)通過組織切片HE染色和脈絡(luò)膜鋪片法檢測實(shí)驗(yàn)組（12只）和對(duì)照組（12只）CNV生成的厚度和面積。
　　【結(jié)果】Dll4和VEGF在CNV區(qū)域有共表達(dá)。Dll4和VEGF蛋白和mRNA的表達(dá)趨勢一致，均在第一天表達(dá)開始上升，第7天時(shí)達(dá)到高峰，第14天時(shí)開始下降。玻璃體內(nèi)注射Avastin后，VEGF和Dll4表達(dá)均下降