全身清除單核-巨噬細(xì)胞對激光誘導(dǎo)的小鼠脈絡(luò)膜新生血管生成的影響.pdf

1、研究背景 脈絡(luò)膜新生血管（CNV）可發(fā)生在多種眼部疾病中，如年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）、特發(fā)性脈絡(luò)膜新生血管、眼組織胞漿菌病綜合征（OHS），以及眼底血管樣條紋（AS）、病理性近視和外傷性脈絡(luò)膜破裂等。 CNV 好發(fā)于黃斑，由其引發(fā)的滲出、出血及瘢痕形成等改變可導(dǎo)致視力喪失，是致盲的主要原因之一。如何防治CNV 是當(dāng)前眼科學(xué)研究的重要課題。CNV的病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能與增齡性改變、缺氧、以及其他引發(fā)Bruch膜

2、損傷或細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）改變的多種因素相關(guān)。近期研究發(fā)現(xiàn)，眼部的炎癥反應(yīng)和免疫活化在CNV 的發(fā)生和發(fā)展中也起著重要的作用，其中巨噬細(xì)胞（Mφ）可能起主要作用。在手術(shù)切除CNV 標(biāo)本和CNV 動物模型中均可見Mφ浸潤；CNV 中的Mφ可產(chǎn)生多種血管活性因子和炎癥介質(zhì)，如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）和腫瘤壞死因子（TNF-α）等；Mφ與視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞之間存在的正反饋?zhàn)饔锰崾荆cRPE 細(xì)

3、胞的相互作用在CNV 的發(fā)生發(fā)展中可能起著關(guān)鍵的作用；減少M(fèi)φ在激光斑處的浸潤可減輕激光誘導(dǎo)CNV 的嚴(yán)重程度。因此研究Mφ在CNV 發(fā)生發(fā)展中的作用將有助于了解CNV 的生成機(jī)制，為有效防治CNV相關(guān)疾病提供思路。 目的 觀察全身清除單核-巨噬細(xì)胞對激光誘導(dǎo)的小鼠CNV 生成率的影響，探討Mφ在CNV 生成中的作用及其機(jī)制。 方法 采用腹腔注射Cl2MDP-lip方法全身清除單核-巨噬細(xì)胞。對4 只Cl

4、2MDP-lip小鼠（正常成年C57BL/6J小鼠，腹腔注射Cl2MDP-lip原液0.2ml/只），PBS-lip小鼠（腹腔注射PBS-lip原液，0.2ml/只）及正常小鼠（不進(jìn)行任何注射）各1 只，通過流式細(xì)胞儀分析注射后2d血液中單核細(xì)胞數(shù)量和免疫組化法觀察脾臟中的Mφ數(shù)量，以確定藥物效果。選取70 只正常成年C57BL/6J小鼠，每只動物隨機(jī)選一只眼，采用532nm倍頻激光光凝法建立CNV模型。 實(shí)驗(yàn)分為3 組：①正常

5、對照組（30 只），即只建立CNV模型，不進(jìn)行其他干預(yù)；②全身清除單核-巨噬細(xì)胞組（Cl2MDP-lip組，20 只），于激光光凝前3d、1d及光凝后1d、3d等4 個時間點(diǎn)腹腔注射Cl2MDP-lip原液（0.2ml/只/次）；③PBS-lip平行對照組（PBS-lip組，20 只），每只小鼠于上述4 個時間點(diǎn)腹腔注射PBS-lip原液0.2ml/只/次）。各組分別于光凝后7d和14d行眼底熒光素血管造影（FFA）檢查，于3d、14d

6、、28d和56d摘除眼球制作眼后段組織切片，進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，以了解CNV生成率及其嚴(yán)重程度。對Cl2MDP-lip組和正常對照組小鼠激光后3d的眼球組織切片行免疫熒光染色，觀察激光斑處Mφ浸潤、內(nèi)皮細(xì)胞增生、以及VEGF蛋白表達(dá)的情況。 結(jié)果 與正常小鼠和PBS-lip小鼠相比，腹腔注射Cl2MDP-lip后2d時，Cl2MDP-lip小鼠血液單核細(xì)胞明顯減少，脾臟組織內(nèi)Mφ幾近消失，表明腹腔注射Cl2MDP-lip

7、 可有效清除單核- 巨噬細(xì)胞。正常對照組/PBS-lip 組/Cl2MDP-lip組小鼠激光后7d和14d時CNV生成率分別為60.68％/60.12％/62.30％和61.84％/61.90％/62.5％（P>0.05）；激光后3d，Cl2MDP-lip組小鼠激光損傷處細(xì)胞密度明顯下降（P<0.05）；激光后14d時，CNV厚度及面積明顯小于其他兩組（P<0.05）；28d時，CNV面積小于其他兩組（P<0.05），但CNV厚度差異不

8、顯著（P>0.05）；56d時，各組間CNV厚度及面積均無明顯差異（P>0.05）；PBS-lip組與正常對照組各指標(biāo)無明顯差異（P>0.05）。 與正常對照鼠比較，Cl2MDP-lip小鼠激光后3d光斑處Mφ明顯減少（P<0.001），內(nèi)皮細(xì)胞及VEGF表達(dá)量亦呈減少趨勢。 結(jié)論 早期全身清除單核-巨噬細(xì)胞可減輕CNV 生成的嚴(yán)重程度，但并不能阻止CNV 的生成。這種作用可能是通過減少內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞的增生浸潤和