內(nèi)皮微粒對(duì)單核細(xì)胞參與的血管新生的影響.pdf

1、研究背景:內(nèi)皮微粒(Endothelial microparticles,EMPs)是內(nèi)皮細(xì)胞在新陳代謝、激活或凋亡時(shí)分泌到細(xì)胞間隙和體液中的囊泡樣物質(zhì)。最近幾年,針對(duì)內(nèi)皮微粒的研究已有很多。Jy W等人的實(shí)驗(yàn)證實(shí):在多發(fā)性硬化中,內(nèi)皮微粒通過激活單核細(xì)胞使更多的單核細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)和多發(fā)性硬化的形成。在Sabatier F等人的研究中,發(fā)現(xiàn):內(nèi)皮微粒能促使單核細(xì)胞分泌組織因子(Tissue factor,TF),引發(fā)TF依賴性促凝反應(yīng)

2、。但是,內(nèi)皮微粒對(duì)單核細(xì)胞參與的血管新生的影響國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。
　　 目的:研究?jī)?nèi)皮微粒對(duì)單核細(xì)胞參與的血管新生的影響,包括研究?jī)?nèi)皮微粒對(duì)單核細(xì)胞介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響和探討內(nèi)皮微粒誘導(dǎo)單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的可能性。
　　 方法:體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),超速離心法沉淀上清中的內(nèi)皮微粒,用無菌PBS重懸；透射電鏡下鑒定內(nèi)

3、皮微粒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)；將內(nèi)皮微粒與THP-1細(xì)胞株共培養(yǎng),運(yùn)用PCR和ELISA方法檢測(cè)THP-1細(xì)胞株內(nèi)VEGF—A、VEGF-C的表達(dá)情況；將HUVECs和原始單核細(xì)胞或者經(jīng)內(nèi)皮微粒激活的單核細(xì)胞放入Transwell小室內(nèi)分隔培養(yǎng),用WST-1試劑盒檢測(cè)HUVECs增殖狀況；運(yùn)用PCR和免疫熒光技術(shù)觀察經(jīng)內(nèi)皮微粒激活的THP—1細(xì)胞株對(duì)內(nèi)皮標(biāo)志物vWF和VEGFR2的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:透射電鏡下可見內(nèi)皮微粒為電子密度低

4、的圓球形,直徑在100-1000nm之間,邊界清楚,周圍環(huán)繞著電子密度較高的磷鎢酸；與對(duì)照組相比,內(nèi)皮微粒刺激的THP-1細(xì)胞株內(nèi)VEGF—A和VEGF-C的蛋白和mRNA水平均升高；增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,不論是與原始單核細(xì)胞共培養(yǎng)還是與內(nèi)皮微粒激活的單核細(xì)胞共培養(yǎng),HUVECs均顯著增多,同時(shí),與內(nèi)皮微粒激活的單核細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)的HUVECs比與原始單核細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)的HUVECs增生明顯；與內(nèi)皮微粒共培養(yǎng)3 d后,THP-1細(xì)胞株中vW

5、F和VEGFR2蛋白表達(dá)為陽(yáng)性,基因表達(dá)為陰性,共培養(yǎng)8 d后vWF和VEGFR2的蛋白和基因表達(dá)均為陰性。
　　 結(jié)論:內(nèi)皮微?？梢酝ㄟ^促使單核細(xì)胞分泌VEGF-A和。VEGF-C來促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖；內(nèi)皮微粒僅能使單核細(xì)胞一過性呈現(xiàn)內(nèi)皮表型,而不能將其轉(zhuǎn)分化為內(nèi)皮細(xì)胞。
　　 意義:本研究為創(chuàng)傷修復(fù)、腫瘤轉(zhuǎn)移等生理病理過程提供了新的血管再生機(jī)制,為心血管疾病的治療提供了一個(gè)新角度,對(duì)血管再生領(lǐng)域的其他研究者有一定參考價(jià)