大黃炭對激光誘導(dǎo)的小鼠脈絡(luò)膜新生血管模型的干預(yù)療效及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　中藥方劑在治療年齡相關(guān)性黃斑變性(Age-relatedmaculardegeneration，AMD)中取得了良好的臨床療效。已經(jīng)發(fā)明的一種中藥方劑(專利號:WO2012079419)經(jīng)過臨床實驗顯示了其在治療濕性AMD方面的積極作用，此項試驗的目的在于揭示作為方劑成分之一的大黃炭(charred Radix et Rhizoma Rhei，CRRR)對于半導(dǎo)體倍頻激光誘導(dǎo)的小鼠脈絡(luò)膜新生血管(choroidalne

2、ovascularization，CNV)模型的治療效果及其可能機(jī)制。
　　方法:
　　1、用半導(dǎo)體倍頻激光照射C57BL/6小鼠，通過引起B(yǎng)ruch's膜的破裂誘發(fā)CNV。
　　2、將誘發(fā)了CNV的30只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為CRRR干預(yù)組(15只)和對照組（15只）。
　　3、將CRRR干預(yù)組的小鼠給予CRRR的水溶液灌胃（濃度為0.6 g/100 ml;劑量為1 ml/0.1 kg;一天兩次灌胃，共計2

3、1天）。
　　4、將對照組的小鼠給予生理鹽水灌胃（劑量為1 ml/0.1 kg;一天兩次灌胃，共計21天）。
　　3、將CRRR干預(yù)組和對照組的各5只小鼠在半導(dǎo)體倍頻激光照射后第7天處死，收集視網(wǎng)膜組織采用定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative polymerase chain reaction，qPCR)測定白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)和血管內(nèi)皮生長因子(vascularepitheli

4、al growth factor，VEGF)在mRNA水平的表達(dá)。
　　4、將CRRR干預(yù)組和對照組的各5只小鼠在半導(dǎo)體倍頻激光照射后第7天處死，收集視網(wǎng)膜組織采用western blot測定IL-10和VEGF的蛋白表達(dá)。
　　5、在半導(dǎo)體倍頻激光照射后的第14天和第21天分別將CRRR干預(yù)組和對照組的小鼠進(jìn)行眼底熒光血管造影（fundus fluorescein angiography，F(xiàn)FA）檢查，將造影圖片進(jìn)行分級以

5、評估血管滲漏的程度。
　　6、在半導(dǎo)體倍頻激光照射后第22天，將CRRR干預(yù)組和對照組其余的小鼠處死，摘取眼球后制備視網(wǎng)膜鋪片，進(jìn)行三維共焦顯微鏡檢查以評估CNV的體積。
　　結(jié)果:
　　1、在半導(dǎo)體倍頻激光照射后的14天和21天，將FFA圖片進(jìn)行分級并比較，在將CRRR干預(yù)組和對照組中與臨床相關(guān)的組織損害（2b級）的比較中沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)意義的差異。
　　2、在半導(dǎo)體倍頻激光照射后第7天，qPCR顯示CRRR干

6、預(yù)組相對于對照組而言，IL-10在mRNA水平的表達(dá)顯著增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.05)。
　　3、在半導(dǎo)體倍頻激光照射后第7天，Western blot顯示CRRR干預(yù)組相對于對照組而言，IL-10的蛋白表達(dá)顯著增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.05）。
　　4、在半導(dǎo)體倍頻激光照射后7天，qPCR顯示CRRR干預(yù)組相對于對照組而言，VEGF在mNA水平的表達(dá)沒有顯著增加，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，（P＞0.05）<

7、br>　　5、在半導(dǎo)體倍頻激光照射后第7天，Western blot顯示CRRR干預(yù)組相對于對照組而言，VEGF的蛋白表達(dá)沒有顯著增加，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，（P＞0.05）。
　　6、在半導(dǎo)體倍頻激光照射后22天，用共焦顯微鏡對視網(wǎng)膜鋪片的CNV進(jìn)行體積測定，在CRRR干預(yù)組和對照組的比較中沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)意義的差異，（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、CRRR干預(yù)組相對于對照組而言，IL-10在mRNA水平的表達(dá)