抗斑馬魚血管生成中藥鱉甲、青皮對(duì)VEGF、Notch-Dll4通路的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　以血管發(fā)育為治療靶點(diǎn)，包括抑制血管和促血管治療等已經(jīng)成為諸如癌癥、心血管疾病等常見疾病的新興治療手段。然而，對(duì)于血管發(fā)育的過程以及其分子調(diào)節(jié)機(jī)制了解還不完全。動(dòng)脈和靜脈血管是血管系統(tǒng)發(fā)育過程中最早形成的重要部分，它們對(duì)于胚胎和成體都具有重要的作用，但它們之間在結(jié)構(gòu)和功能上卻又不盡相同。
　　血管內(nèi)皮生長因子VEGF家族被認(rèn)為是最為重要的分泌型促血管生成因子，在胚胎血管系統(tǒng)發(fā)育和腫瘤血管生成過程中均發(fā)揮重要作用。在

2、血管發(fā)育過程中VEGF、Notch信號(hào)通路關(guān)系密切，雖然可各自獨(dú)立發(fā)揮不同作用，但二者之間也存在相互作用。
　　中醫(yī)藥治療腫瘤已有上千年的歷史，積累了豐富的臨床資料，軟堅(jiān)散結(jié)是治療腫瘤主要大法，對(duì)于這類藥物在抗血管新生方面作用值得進(jìn)一步研究。
　　本實(shí)驗(yàn)以TG品系的fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚為模型，利用其綠色熒光蛋白顯影特質(zhì)，在顯微鏡下觀察鱉甲水提物及青皮水提物對(duì)斑馬魚體內(nèi)血管生成的抑制效果，并且，借此進(jìn)一步研究具有抗

3、新生血管作用的鱉甲、青皮對(duì)VEGF、Notch/Dll4通路的調(diào)控作用。
　　方法：
　　1、選用TG品系的fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚為生物模型。將新鮮配置好的鱉甲、青皮提取物處理受精后的斑馬魚胚胎，藥物處理實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將各組胚胎在體式熒光顯微鏡下進(jìn)行血管表型觀察和拍照，以分析各個(gè)樣品對(duì)斑馬魚體節(jié)間血管（ISVs）生成的影響。
　　2、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)斑馬魚胚胎受到鱉甲、青皮水提物處理后，Notch

4、信號(hào)通路中Dll4/Notch1a/HEY2/EFNB2a以及VEGF信號(hào)通路中VEGFaa/VEGFR1/VEGFR2的表達(dá)情況，研究這兩個(gè)信號(hào)通路在斑馬魚胚胎發(fā)育過程中的生理學(xué)作用。
　　結(jié)果：
　　1、與陰性對(duì)照組相比，鱉甲水提物組、青皮水提物組干預(yù)的實(shí)驗(yàn)組斑馬魚胚胎ISVs及DLAV的熒光表達(dá)均具有差異，提示中藥水提物組具有抑制斑馬魚新生血管生成的作用。
　　2、鱉甲、青皮兩種水提物均能夠顯著上調(diào)斑馬魚胚胎Dl

5、l4、Notch1a、HEY2表達(dá)水平（P<0.05）。青皮水提物能夠非常顯著上調(diào)斑馬魚胚胎EFNB2a表達(dá)水平（P<0.01）。可以推測(cè)兩種中藥水提物抑制斑馬魚胚胎新生血管生成與Notch-Dll4通路上調(diào)活化有關(guān)。
　　3、鱉甲、青皮兩種水提物能夠顯著上調(diào)斑馬魚胚胎VEGFaa，其中青皮水提物組尤為顯著（p<0.01）；,鱉甲、青皮兩種中藥水提物能夠顯著上調(diào)斑馬魚胚胎VEGFR1，（p<0.01）；鱉甲、青皮兩種中藥水提物能夠

6、顯著上調(diào)斑馬魚胚胎VEGFR2表達(dá)水平，其中青皮水提物組尤為顯著（p<0.01）可以推測(cè)兩種中藥水提物能夠活化VEGF通路。
　　4、瓦他拉尼組較空白對(duì)照組VEGFaa基因表達(dá)水平明顯上升，（p<0.05）；瓦他拉尼能明顯抑制斑馬魚胚胎VEGFR1/VEGFR2的mRNA表達(dá)水平，（p<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、鱉甲、青皮水提物在轉(zhuǎn)基因斑馬魚生物模型上具有抑制新生血管的作用；
　　2、鱉甲及青皮水提物抑制