對涼血止血類中藥抗新生血管生成作用的斑馬魚篩選實驗.pdf

1、目的：
　　抗腫瘤新生血管治療腫瘤已經(jīng)得到現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的認可，醫(yī)療界在治療腫瘤該領(lǐng)域求新求變，力求研發(fā)出新的腫瘤藥物。
　　而中藥抗腫瘤新生血管治療腫瘤已經(jīng)得到證實，在中醫(yī)治療腫瘤的各種理論上，腫瘤在八綱辨證屬于里證、實證，在衛(wèi)氣營血辨證屬于血分證，葉天士說“在衛(wèi)汗之可以；到氣才可清氣；入營尤可透熱轉(zhuǎn)氣；入血就恐耗血動血，直須涼血散血；”。而臨床涼血止血藥在腫瘤患者后期發(fā)熱的治療中也是常用藥物。所以，對于涼血止血類藥物在抗血管新

2、生方面作用值得進一步研究。在該實驗組中，選取五種涼血止血類藥物來研究其抗血管生成的作用。分別為：大薊、小薊、地榆、側(cè)伯葉、白茅根。已有相關(guān)研究表明，上述五種藥物具有抗腫瘤的作用。而以斑馬魚為模型的抗血管新生方面研究不足。本實驗以TG品系的fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚為模型，利用其綠色熒光蛋白顯影特質(zhì)，在顯微鏡下觀察中藥水提物成分對斑馬魚體內(nèi)血管生成的抑制效果，并且，借此進一步篩選具有抗新生血管作用的中藥。
　　方法：
　

3、　選用TG品系的fli1a-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚為生物模型。將新鮮配置好的中藥提取物（工作濃度：200μg/ml）（分別為：大薊、小薊、地榆、炒側(cè)伯葉、白茅根）和陽性對照藥物-PTK787（5μg/ml）處理受精后22小時（22hpf）的斑馬魚胚胎直至48hpf。每個樣品處理30只斑馬魚胚胎，在12孔板（Falcon）中實驗。藥物處理實驗結(jié)束后，將各組將各藥物濃度處理后的胚胎在體式熒光顯微鏡（Nikon SMZ-1500體式熒光顯微鏡）

4、下進行血管表型觀察和拍照，拍照時相為48hpf，以分析各個樣品對斑馬魚體節(jié)間血管（ISV）生成的影響。完整的體節(jié)間血管（ISV）是衡量斑馬魚血管新生（angiogenesis）的重要指標。完整的ISV是指：連接背主動脈（DA）和背長軸血管（DLAV）之間的那一段血管。在血管篩選實驗中，同時對各個樣品誘導(dǎo)的斑馬魚發(fā)育毒性和死亡也進行觀察和統(tǒng)計。
　　結(jié)果：
　　炒側(cè)伯葉、白茅根具有抑制斑馬魚新生血管生成的作用，大薊、小薊不具有