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1、目的:低劑量順鉑節(jié)律(low-dose metrononuc,LDM)化療抗血管生成作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究。 方法:①采用MTT法檢測(cè)低劑量順鉑節(jié)律化療對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECs、人肝癌細(xì)胞株HepG2增殖的影響,確定低劑量順鉑在非細(xì)胞毒濃度下抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的劑量范圍。②以接種H22肝癌細(xì)胞的昆明小鼠為動(dòng)物模型,應(yīng)用不同濃度的順鉑不同頻率給予腹腔化療(節(jié)律組:順鉑0.6mg/(kg.d)每日腹腔注入,每周連續(xù)5次:最大耐
2、受劑量組:順鉑9mg/(kg.d)1次腹腔注入),在小鼠處死后完整剝離皮下瘤結(jié)節(jié),采用免疫組化法檢測(cè)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的表達(dá)③采用雞胚絨毛尿囊膜(CAM)模型,觀察低劑量順鉑持續(xù)作用對(duì)雞胚絨毛尿囊膜新生血管的抑制作用:雞胚隨機(jī)分為5組,每組12只。將不同濃度順鉑分別加到孵化9天的CAM上,繼續(xù)孵化3天,在解剖顯微鏡下觀察并計(jì)算用藥后血管密度。 結(jié)果:①低劑量順鉑在非細(xì)胞毒濃度下(0.3~1.2μ g/ml)持續(xù)作用24
3、、48、72h,能有效抑制HUVECs的增殖,且在0.3~1.2μ g/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)性,低劑量順鉑組的吸光度值明顯低于對(duì)照組,差異有顯著性(F=14.00~206.80,q=2.18~39.63,P<0.05)。相同條件下,低劑量順鉑在此劑量范圍內(nèi)對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2則未顯示出明顯抑制作用,順鉑0.3~1.2μ g/ml各組間吸光度值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.51~0.79,q=0.47~1.54,P>0.05)
4、。當(dāng)順鉑濃度達(dá)到2.4μ g/ml時(shí),對(duì)HepG2的抑制率明顯增高,其吸光度值與其余各組比較差異有顯著性( F=38.84~90.04,q=11.24~19.62,P<0.05)。②免疫組化結(jié)果示:肝癌中EGFR有較高表達(dá),經(jīng)順鉑作用后表達(dá)下降,其中順鉑節(jié)律組EGFR表達(dá)最低,最大耐受劑量組EGFR表達(dá)居中,與對(duì)照組比較差異有顯著性(F=140.67,q=4.17~22.31,P<0.05)。③低劑量順鉑持續(xù)作用對(duì)雞胚尿囊膜的血管發(fā)生具
5、有顯著影響:低劑量順鉑實(shí)驗(yàn)組中新生血管的生成明顯減少,載體周?chē)芫W(wǎng)模糊,管徑不均勻且連續(xù)性中斷。低劑量順鉑各組CAM微血管數(shù)目明顯少于生理鹽水組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=184.44,q=3.18~36.37,P<0.05)。隨著順鉑濃度的增大,對(duì)CAM血管的抑制作用更加顯著,呈明顯的濃度依賴(lài)關(guān)系,順鉑0.3~2.4μ g/ml范圍內(nèi)血管抑制率達(dá)30.87~60.61%。 結(jié)論:低劑量順鉑節(jié)律化療在體內(nèi)外具有一定抗血管生成作用
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