多西他賽節(jié)律化療聯(lián)合地塞米松抑制小鼠肺癌血管生成的實驗研究.pdf

1、背景和目的： 20世紀后期，癌癥治療的一大進步就是化療藥物的發(fā)展和臨床應(yīng)用。這些藥物通過損傷細胞DNA或抑制微管功能，進而阻止細胞增殖，導(dǎo)致細胞死亡而發(fā)揮抗瘤作用。為了追求最大幅度地殺滅腫瘤細胞，化療藥物的劑量常用至機體的最大耐受劑量(Maximum Tolerated Dose，MTD)。但MTD化療常引起嚴重的毒副作用，在機體從化療損傷中恢復(fù)的間歇期內(nèi)，腫瘤細胞(包括選擇性耐藥克隆)以及對其有支持作用的間質(zhì)細胞也得以重新增殖

2、。因此，MTD化療不僅引起嚴重的毒副作用，降低腫瘤患者的生活質(zhì)量，還容易產(chǎn)生耐藥性，治療效果也欠佳。 為了避免MTD化療引起的問題，研究者們開始尋找新的給藥方式，旨在提高抗瘤和/或抗轉(zhuǎn)移效果并同時降低毒性。腫瘤血管生成對維持原發(fā)腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。Judah Folkman于1971年第一次提出針對腫瘤血管生成的靶向治療策略，此后人們轉(zhuǎn)而開始轉(zhuǎn)而研究化療藥物的抗血管生成作用。實際上，所有類型的化療藥物都是通過損傷分裂

3、細胞的DNA或破壞其微管而發(fā)揮抗瘤作用。內(nèi)皮細胞分裂發(fā)生于新生血管形成期間，其也包括于腫瘤血管生成中，同基本處于靜止狀態(tài)的正常血管相比，腫瘤血管內(nèi)皮細胞處于高度生長狀態(tài)，對細胞毒性藥物更敏感。 研究發(fā)現(xiàn)，某些細胞毒性藥物能夠抑制血管生成過程，尤其是在低劑量、高頻率給藥的情況下。與MTD化療治療中伴一較長間歇期(常為2～3周)的給藥方式相比，低劑量、高頻率或持續(xù)給藥對腫瘤血管內(nèi)皮的靶向作用更強，這種類型的化療方案被稱為“節(jié)律化療”

4、或“抗血管生成化療”。節(jié)律化療以腫瘤血管內(nèi)基因型穩(wěn)定、活化的內(nèi)皮細胞為治療靶點，可降低耐藥性的發(fā)生，提高治療效果，又因其用藥量較低還能降低化療的毒副作用。另外，節(jié)律化療與其它抗血管生成藥物聯(lián)合應(yīng)用還有協(xié)同作用。研究表明，有不少腫瘤的發(fā)生、進展和慢性炎癥有著密切的關(guān)系。炎癥反應(yīng)除了可以引起抗腫瘤反應(yīng)之外，更多的是促進了腫瘤的增殖、血管生成和轉(zhuǎn)移。炎性血管生成似乎成為了腫瘤生長和擴散的中心力量，這個觀點可以通過應(yīng)用傳統(tǒng)的抗炎藥物而達到抑制血

5、管生成來得到證實。炎性血管生成的理論提出了新的治療靶點，通過抗炎治療來抑制腫瘤血管新生。目前節(jié)律化療聯(lián)合抗炎治療的報道國外少見，國內(nèi)尚未見到相應(yīng)報道。 本課題以荷Lewis肺癌的C57BL/6小鼠為模型，初步探討常用化療藥物多西他賽(docetaxel)節(jié)律化療及抗炎藥物地塞米松(dexamethasone)抑制腫瘤血管生成的作用，同時比較節(jié)律化療與抗炎治療對腫瘤的控制情況及其毒副反應(yīng)等。 方法: 建立C57BL

6、/6小鼠荷Lewis肺癌模型后，隨機分為以下四組：①多西他賽節(jié)律組。腹腔注射docetaxel 5mg/kg，隔d一次；②地塞米松組。腹腔注射dexamethasone5mg/kg，每d一次；③聯(lián)合組。腹腔注射docetaxel 5mg/kg，隔d一次，dexamethasone5mg/kg，每d一次；④對照組。腹腔注射生理鹽水0.2mL，每d一次。每組10只小鼠。以上各組均于接種后第6d(皮下腫瘤約100～200mm<'3>)起開始給

7、藥，持續(xù)給藥8d。每日觀察小鼠飲食、活動及一般狀況。接種后第15d全部斷頸處死小鼠。實驗過程中，連續(xù)測量小鼠腫瘤體積和體重，分別繪制腫瘤生長曲線和小鼠體重變化曲線，觀察各組的抑瘤效果及毒副作用。處死小鼠后稱瘤重，用免疫組化方法測定各組腫瘤組織的微血管密度(MVD)及缺氧誘導(dǎo)因子1-a(HIF-a)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)的表達情況，并進行常規(guī)組織學(xué)觀察。實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行統(tǒng)計學(xué)處理，各組MVD比較采用單因素

8、方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗；各組HIF-la、NF-κB的表達率比較采用非參數(shù)檢驗Mann-Whitney兩獨立樣本比較法，以a=0.05作為檢驗水準。 結(jié)果： 1．多西他賽節(jié)律組、地塞米松組和聯(lián)合組腫瘤生長曲線較平緩，對照組腫瘤生長曲線較陡直。 2.多西他賽節(jié)律組、地塞米松組和聯(lián)合組小鼠未出現(xiàn)明顯體重下降，體重于平穩(wěn)狀態(tài)中緩慢上升；對照組小鼠體重逐漸增加，增長幅度較快。實驗結(jié)束時，多西他賽節(jié)律組、地塞米松組、聯(lián)合

9、組和對照組的平均瘤重分別為(2.85±0.30)g、(2.80±0.31)g(2.46±0.21)g、(4.25±0.42)g。 3.肉眼觀察大體標本，對照組腫瘤假膜不完整，瘤組織顏色紅潤、質(zhì)脆；多西他賽節(jié)律組、地塞米松組、聯(lián)合組瘤塊假膜完整，瘤組織顏色蒼白、質(zhì)韌；光鏡下觀察組織學(xué)(HE染色)，對照組呈現(xiàn)灰紅色，血管豐富，中心壞死；多西他賽節(jié)律組、地塞米松組、聯(lián)合組瘤組織中心及邊緣常見灶狀或大片狀壞死，血管明顯減少。 4

10、.多西他賽節(jié)律組、地塞米松組、聯(lián)合組和對照組的MVD分別為(15.89±2.28)、(15.90±1.92)、(12.44±1.72)和(27.10±2.06)。多西他賽節(jié)律組、地塞米松組和聯(lián)合組的MVD比對照組顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 5.多西他賽節(jié)律組、地塞米松組和聯(lián)合組的HIF-1a在腫瘤組織中的表達較對照組顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 6．多西他賽節(jié)律組、地塞米松組和聯(lián)合組的N