低劑量三七素的神經(jīng)保護作用研究.pdf

1、研究背景：
　　三七屬五加科多年生草本植物，又稱為田七，是我國的傳統(tǒng)中藥材之一，被明代著名藥學家李時珍稱為“金不換”。因其有降血壓、擴血管、改善微循環(huán)、抗炎、調(diào)節(jié)機體免疫功能、活血化瘀等功效而被普遍用于治療心腦血管疾病及免疫力低下等多種疾病。三七素（dencichine）是三七中的主要止血活性成分，但人畜在長期食用含三七素的豆科山黧豆屬植物后出現(xiàn)不可逆轉的運動功能失調(diào)及神經(jīng)元進行性變性壞死，對上述現(xiàn)象的研究發(fā)現(xiàn)，三七素作為一種興奮

2、性氨基酸具有神經(jīng)毒作用。三七素的藥用價值及其神經(jīng)毒性作用的矛盾使其成為廣大科研工作者的研究熱點。三七素是一種興奮性氨基酸類似物，其具有兩種分子結構體，包括L-BOAA和D-BOAA，研究表明具有神經(jīng)毒性的主要是L-BOAA，通過作用于非NMDA受體產(chǎn)生其神經(jīng)毒性作用，但是D-BOAA卻不會產(chǎn)生神經(jīng)毒性效應。由于谷氨酸及其受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中具有重要的生理及病理作用，是腦缺血缺氧損傷、癲癇、癡呆等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病導致腦損傷的重要發(fā)病機制，

3、但研究又發(fā)現(xiàn)低劑量谷氨酸預處理可增強動物對上述疾病的耐受力。那么小劑量三七素預處理是否也會像谷氨酸一樣產(chǎn)生一定的神經(jīng)保護作用呢？從這一角度出發(fā)我們擬對低劑量三七素預處理對神經(jīng)系統(tǒng)損傷的作用進行初步探索。選取具有神經(jīng)元特性的PC12細胞為研究對象，研究三七素預處理對多種損傷因素導致的PC12細胞損傷的影響，初步探討低劑量三七素對PC12細胞的作用及其可能機制。
　　實驗一：不同濃度三七素對PC12細胞的影響
　　目的：研究不同

4、濃度的三七素對PC12細胞生長狀態(tài)的影響。方法：用DMEM+10％FBS細胞培養(yǎng)液復蘇、傳代PC12細胞，在細胞生長狀態(tài)旺盛時進行實驗。接種48小時后每組細胞中加入不同終濃度的三七素，96小時后進行細胞形態(tài)學觀察且用MTT法評估細胞活性。結果：三七素作用48小時后，與正常對照組相比，5mM三七素組PC12細胞數(shù)量明顯減少，胞體回縮，突觸減少。其余各組細胞形態(tài)無明顯變化，數(shù)量無減少。MTT結果與鏡下觀察結果相一致且0.01mM組有細胞增殖

5、作用。結論：低劑量（<2.5mM）三七素對PC12細胞生長無明顯抑制作用且有一定的促增殖作用；高劑量三七素對PC12細胞具有細胞毒性，抑制PC12細胞的生長。
　　實驗二：低劑量三七素預處理對不同損傷模型下PC12細胞的保護作用
　　目的：研究低劑量三七素預處理對損傷PC12細胞的保護作用和可能的作用機制。方法：建立谷氨酸損傷模型、慢性缺氧模型及過氧化氫損傷模型，細胞培養(yǎng)48小時后加入三七素（0.01mM）預處理96小時，然

6、后加谷氨酸損傷4小時，用MTT法檢測細胞活力和Hoechst33342/PI雙重染色法來檢測細胞的死亡變化。結果：MTT法顯示4小時的谷氨酸損傷能造成50％的細胞損傷，三七素預處理組PC12細胞損傷情況明顯減輕，Hoechst33342/PI雙重染色法也得到相似的趨勢。慢性缺氧損傷12小時可造成約30％細胞損傷，三七素預處理組細胞損傷大約10％。過氧化氫損傷細胞60％，三七素預處理組損傷細胞比率為50％，較單純損傷組稍低，但兩者差別不具

7、有統(tǒng)計學意義，提示三七素對過氧化氫引起的細胞損傷無明顯作用。結論：低劑量三七素預處理能夠減輕谷氨酸損傷及慢性缺氧損傷導致的PC12細胞損傷及活力減低，提示三七素具有潛在神經(jīng)保護作用，但其上述保護作用及對過氧化氫損傷PC12細胞無影響的具體機制有待進一步研究。
　　實驗三：低劑量三七素對谷氨酸損傷的PC12細胞的治療作用
　　目的：研究三七素對谷氨酸損傷的PC12細胞的影響。方法：用谷氨酸復制體外培養(yǎng)的PC12細胞損傷模型，采

8、用MTT法、Hoechst33342/PI雙重染色法分別研究高、低劑量三七素對谷氨酸所致的PC12細胞損傷的影響。結果：谷氨酸刺激后，PC12細胞存活率較對照組顯著降低（P<0.05）、凋亡顯著增強（P<0.05）。給予高劑量三七素可加重谷氨酸引起的PC12增殖力降低（P<0.05）、凋亡增強（P<0.05）。但低劑量三七素干預后，細胞存活率較模型組顯著升高（P<0.05），凋亡較模型組明顯降低（P<0.05）。結論：高劑量三七素可加重