紫草素聯(lián)合低劑量阿糖胞苷對(duì)AML細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:研究紫草素協(xié)同低劑量阿糖胞苷抑制急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株 HL-60和U937細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用及其初步機(jī)制。
　　方法：CKK8法檢測(cè)不同濃度的阿糖胞苷和紫草素對(duì)兩種細(xì)胞的增殖抑制作用；Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記法檢測(cè)低濃度藥物單獨(dú)以及聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；用caspase-3蛋白活性檢測(cè)試劑盒和Western blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡中caspase-3的活化及其底物PARP的裂解情況； PI染色法

2、檢測(cè)細(xì)胞死亡比例和阿糖胞苷和紫草素對(duì)細(xì)胞周期的阻滯作用；Carboxy-H2DCFD染色法和JC-1染色法檢測(cè)藥物及各種抗氧化劑對(duì)細(xì)胞活性氧水平和線粒體膜電位的影響；侵襲實(shí)驗(yàn)觀察低劑量阿糖胞苷和紫草素對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響，Western blot、流式細(xì)胞術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR三種方式檢測(cè)低劑量阿糖胞苷對(duì)CD147基因和蛋白表達(dá)的影響；Western blot檢測(cè)阿糖胞苷和紫草素對(duì)MAPK通路的影響。
　　結(jié)果：阿糖胞苷和紫草素對(duì)

3、HL-60和U937細(xì)胞增殖都出現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴(lài)性抑制，從而計(jì)算出紫草素和阿糖胞苷抑制半數(shù)HL-60和U937增殖的藥物濃度（IC50），確定實(shí)驗(yàn)中所用藥物劑量不會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。紫草素可以濃度依賴(lài)性地促進(jìn)細(xì)胞凋亡、降低細(xì)胞線粒體膜電位和提高細(xì)胞內(nèi)活性氧分子水平，將HL-60細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期G1期，U937細(xì)胞阻滯在G2期。低濃度的阿糖胞苷（100nM）和紫草素（0.5M）聯(lián)合作用時(shí)，相比較于單獨(dú)藥物處理組，細(xì)胞凋亡顯著增加（P<0.0

4、5)，活性氧相對(duì)水平顯著升高（P<0.05），細(xì)胞線粒體膜電位出現(xiàn)了顯著下降（P<0.05)。低濃度的阿糖胞苷可以通過(guò)誘導(dǎo)CD147的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞侵襲，紫草素可以抑制CD147的表達(dá)從而抑制細(xì)胞的侵襲能力，同時(shí)，低濃度的阿糖胞苷和紫草素可以協(xié)同活化JNK和p38途徑，抑制ERK通路的活性。
　　結(jié)論：紫草素聯(lián)合低濃度的阿糖胞苷可以協(xié)同使HL-60和U937細(xì)胞發(fā)生增殖抑制、周期抑制和凋亡，其機(jī)制可能與ROS的大量產(chǎn)生引起的損傷導(dǎo)致