2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景和目的:
  USP7作為一個去泛素酶在腫瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮著一定的作用;Ki-67作為一個細(xì)胞增殖的標(biāo)記分子,同時也參與促進(jìn)腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移。我們在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)現(xiàn)USP7能夠調(diào)控Ki-67促進(jìn)癌癥的發(fā)展。
  研究方法:
  1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測正常肺組織和NSCLC組織中USP7表達(dá);應(yīng)用Western blot、Real-time PCR方法檢測人正常肺上皮細(xì)胞Beas2B和NSCLC細(xì)胞

2、中USP7蛋白和mRNA;通過在NSCLC細(xì)胞中用USP7活性抑制劑P22077及轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒干預(yù)后,運(yùn)用CCK8和AO-EB雙熒光染色法檢測細(xì)胞的增殖和存活狀態(tài)。
  2.在NSCLC細(xì)胞中用P22077及轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒干預(yù)后,通過Western blot檢測MCM2、PCNA蛋白表達(dá),通過細(xì)胞免疫熒光(CIF)檢測Ki-67蛋白表達(dá);運(yùn)用CIF檢測人正常肺上皮細(xì)胞Beas2B和NSCLC細(xì)胞中Ki

3、-67蛋白表達(dá);運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測正常肺組織和NSCLC組織中Ki-67表達(dá);通過裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒的A549細(xì)胞增殖成瘤體積。
  3.通過Real-time PCR檢測人正常肺上皮細(xì)胞Beas2B和NSCLC細(xì)胞中Ki-67mRNA表達(dá)和在NSCLC細(xì)胞中用P22077及轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒干預(yù)后,Ki-67mRNA的表達(dá)情況;應(yīng)用CIF,在NSCLC細(xì)胞中檢測USP7與Ki-67

4、的定位情況;應(yīng)用MG132及轉(zhuǎn)染USP7 C223A突變質(zhì)粒后,進(jìn)一步研究USP7對Ki-67的調(diào)控機(jī)制;通過CCK8實(shí)驗(yàn),檢測轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒后細(xì)胞對藥物敏感性影響。
  研究結(jié)果:
  1.在NSCLC組織中USP7在核內(nèi)高表達(dá),并且分化程度越低的組織表達(dá)越高;與Beas2B細(xì)胞相比NSCLC細(xì)胞中USP7的蛋白和mRNA均高表達(dá);應(yīng)用P22077及轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒檢測NSCLC細(xì)胞的增殖效率降低

5、,細(xì)胞保持存活狀態(tài)。
  2.在NSCLC細(xì)胞中應(yīng)用P22077和轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒后MCM2、PCNA的蛋白表達(dá)不變,Ki-67蛋白表達(dá)減少;與Beas2B細(xì)胞相比NSCLC細(xì)胞中Ki-67的蛋白高表達(dá);在NSCLC組織中Ki-67也在核內(nèi)高表達(dá),并且分化程度越低的組織表達(dá)越高;在A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒后,細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤與對照組和NC組比瘤體體積減少顯著。
  3.在Beas2B和NSCL

6、C細(xì)胞Ki-67的mRNA基本一致,在NSCLC細(xì)胞中應(yīng)用P22077、轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒后,Ki-67 mRNA保持不變;在NSCLC細(xì)胞中USP7和Ki-67有共定位現(xiàn)象;MG132拮抗P22077所誘導(dǎo)對Ki-67蛋白表達(dá)下調(diào)作用,應(yīng)用MG132后在轉(zhuǎn)染USP7 siRNA細(xì)胞中Ki-67蛋白表達(dá)恢復(fù);過表達(dá)USP7 C223A后,Ki-67蛋白表達(dá)減少;轉(zhuǎn)染USP7 siRNA質(zhì)粒的細(xì)胞對藥物敏感性無變化,甚至還有所提

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