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文檔簡(jiǎn)介
1、【目的】:
本研究旨在探討miR-200b在人舌鱗癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)與臨床意義以及生物學(xué)意義。
【方法】:
培養(yǎng)正常舌粘膜上皮細(xì)胞株(TEC)為對(duì)照組(A組),不同舌鱗癌細(xì)胞株 SCC-9、SCC-2、TSCCa、Tca8113分為 B、C、D、E組,作為實(shí)驗(yàn)組,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)不同舌鱗癌細(xì)胞株與正常舌粘膜上皮細(xì)胞株中miR-200b的表達(dá)。收集62例舌鱗癌組織與癌旁正常組織,其中癌旁正常組織
2、作為對(duì)照組(A1組),舌鱗癌組織為實(shí)驗(yàn)組(B1組),運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)62例舌鱗癌組織與癌旁正常組織中miR-200b的表達(dá),并分析miR-200b的表達(dá)變化與舌鱗癌患者臨床病理資料的相關(guān)性。運(yùn)用轉(zhuǎn)染技術(shù)將scramble、control-siRNA、miR-200b mimics、Bmi-1-siRNA分別轉(zhuǎn)染于舌鱗癌Tca8113細(xì)胞分成A2、A3、B2、B3四組,其中scramble組(A2組)與miR-200b mimi
3、cs組(B2組),control-siRNA組(A3組)與 Bmi-1-siRNA組(B3組)分別配對(duì),A2、A3為對(duì)照組,B2、B3為實(shí)驗(yàn)組。采用Western blot和qRT-PCR檢測(cè)miR-200b對(duì)Bmi-1基因的蛋白和mRNA表達(dá)變化。采用MTT法檢測(cè)miR-200b與Bmi-1-siRNA對(duì)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞增殖的影響。采用 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè) miR-200b與 Bmi-1-siRNA 對(duì)舌
4、鱗癌Tca8113細(xì)胞侵襲的影響。
【結(jié)果】:
1.qRT-PCR結(jié)果顯示,與A組比較,B、C、D、E組miR-200b的表達(dá)均降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)。與 A1組比較, B1組miR-200b的表達(dá)亦降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。相關(guān)性分析顯示,在62例舌鱗癌組織中,miR-200b的表達(dá)水平與患者的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。
2.Western blot與qRT-PCR
5、結(jié)果顯示,與A2、A3組比較,B2、B3組均能明顯下調(diào)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞中Bmi-1的蛋白與mRNA表達(dá)水平,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3.MTT結(jié)果顯示,與A2、A3組比較,B2、B3組OD值均明顯減小,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
4.Transwell結(jié)果顯示,與 A2、A3組比較,B2、B3組穿過(guò)基質(zhì)膠的Tca8113細(xì)胞數(shù)明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
【
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