HDAC1及E2F1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma，RCC)是泌尿生殖系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤，其中60％-85％為腎透明細(xì)胞癌(clear cell renal cellcarcinoma，ccRCC)，近年來(lái)其發(fā)病率及死亡率有增高的趨勢(shì)。腎透明細(xì)胞癌早期不易被發(fā)現(xiàn)，患者一般沒(méi)有明顯的臨床癥狀，且不到1/3的患者出現(xiàn)血尿、腰部不適及腰部腫塊等典型性癥狀，而目前診斷該病的主要手段為影像學(xué)檢查，如超聲、CT和核磁共振等。即使現(xiàn)在國(guó)民健康

2、意識(shí)及醫(yī)療技術(shù)的提高，其發(fā)病率及檢出率相比以往明顯增加，無(wú)臨床表現(xiàn)而偶爾在體檢中被發(fā)現(xiàn)的病例日益增加，但仍然有一部分患者診斷時(shí)往往為晚期，或許有的患者已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此，探討腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制對(duì)其早期診斷、制定治療方案等方面具有重要意義。
　　轉(zhuǎn)錄因子E2F1(Transcription factor E2F1，E2F1)是E2Fs轉(zhuǎn)錄因子家族中一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄激活因子，其在細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡調(diào)控方面均起著重要作用。組蛋白去

3、乙?；?（Histone deacetylase1，HDAC1）是組蛋白去乙?；窰DACs家族成員之一，可通過(guò)Rb/E2F通路調(diào)控E2F1乙?；?，影響E2F1的轉(zhuǎn)錄活性;當(dāng)E2F1表達(dá)異常時(shí)，會(huì)使細(xì)胞周期紊亂并導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖，進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。大量研究表明:在腫瘤的表觀遺傳修飾的諸多方式中，組蛋白的共價(jià)修飾占有重要地位，其包括有磷酸化、乙?；?、甲基化等，而具有乙?；?去乙?；δ艿慕M蛋白酶中，HDACs家族的HDAC1具有催化

4、組蛋白去乙?；淖饔?，維系著組蛋白的乙?；叭ヒ阴；钠胶鉅顟B(tài)，并與相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（如E2F1）的表達(dá)、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的調(diào)控等密切相關(guān);HDAC1的修飾機(jī)制對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展起作用。表觀遺傳學(xué)研究現(xiàn)已成為腫瘤研究的熱點(diǎn)，因此，本研究以腎透明細(xì)胞癌患者為研究對(duì)象，通過(guò)觀察HDAC1及E2F1的表達(dá)，探討二者與腎透明細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系，從而探討其在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:收集2013年7月至2014年7月河北醫(yī)

5、科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科住院手術(shù)患者的腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本51例（經(jīng)病理證實(shí)均為腎透明細(xì)胞癌），同時(shí)選取24例癌旁組織（遠(yuǎn)離癌組織5cm以上，均經(jīng)病理證實(shí)為正常腎組織）作為對(duì)照組。組織學(xué)分級(jí)按照WHO1997年推薦的Fuhrman三級(jí)分類標(biāo)準(zhǔn);臨床分期按照2010年美國(guó)抗癌協(xié)會(huì)(AJCC)腎癌的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療和免疫治療。所有標(biāo)本分為兩份，一份經(jīng)10％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟塊包埋、切片;另一份標(biāo)本術(shù)后立即以液氮快

6、速冷凍并保存于-80℃冰箱中備用。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法及RT-PCR方法檢測(cè)腎透明細(xì)胞癌組織與對(duì)照組腎組織中HDAC1、E2F1的蛋白表達(dá)及mRNA相對(duì)表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用x2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢驗(yàn)分別比較兩組間HDAC1及E2F1免疫組化染色陽(yáng)性表達(dá)率差異;組間HDAC1及E2F1 mRNA的表達(dá)以吸光度比值統(tǒng)計(jì)，數(shù)值以(x)±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。以上P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:HDAC1及E2F1的蛋白陽(yáng)性表達(dá)均出現(xiàn)在細(xì)胞核。HDAC1蛋白在腎透明細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為62.7％(32/51)，高于對(duì)照組腎組織中的25％(6/24)(P＜0.05);E2F1蛋白在腎透明細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為70.6％(36/51)，高于對(duì)照組腎組織中的37.5％(9/24)(P＜0.05);HDAC1與E2F1的蛋白表達(dá)與患者性別、年齡及瘤體大小無(wú)關(guān)（P＞

8、0.05），而與組織學(xué)分級(jí)及臨床分期有關(guān)，且組織學(xué)分級(jí)及臨床分期越高，蛋白表達(dá)陽(yáng)性率越高（P＜0.05）。
　　2、RT-PCR結(jié)果顯示:HDAC1mRNA在腎透明細(xì)胞癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為（0.351±0.151），高于對(duì)照組腎組織（0.102±0.044）（P=0.000）;E2F1mRNA在腎透明細(xì)胞癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為（0.318±0.092），高于對(duì)照組腎組織（0.135±0.032）(P=0.004);以上差異有統(tǒng)計(jì)