轉錄因子E2F1在腎透明細胞癌中的表達和作用.pdf

1、目的:細胞周期轉錄因子E2F1是E2F家族最早被克隆的一員,調節(jié)細胞的增殖、分化、凋亡、死亡等。近年來研究發(fā)現(xiàn)E2F1表達水平及其活性變化與腫瘤的發(fā)生和惡性進展密切相關。有學者研究表明E2F1在乳腺癌,結腸癌,黑色素瘤等不同類型腫瘤中的表達異常,但關于E2F1在腎透明細胞癌中的表達,目前尚無報道。本實驗主要研究E2F1在腎透明細胞癌組織和對應瘤旁組織中的表達情況,對E2F1的mRNA相對表達量和臨床病理資料進行相關性分析,并在腎透明細胞

2、癌細胞株中進行E2F1基因的過表達,研究對腫瘤細胞增殖和侵襲能力的影響,了解E2F1在腎透明細胞癌發(fā)生和惡性進展中的作用。為臨床治療腎透明細胞癌尋找新的靶點和途徑。
　　方法:①通過實時定量聚合酶鏈式反應(real-timePCR)及蛋白免疫印跡(western-blot)方法檢測52例腎透明細胞癌及其相對應的癌旁組織中E2F1的mRNA及蛋白表達水平,并采用相關性分析分別檢驗腫瘤組織E2F1基因的mRNA表達水平相關性;②通過w

3、estern-blot方法檢測人正常腎小管上皮細胞株HKC,腎透明細胞癌細胞株786-O,A498,Caki-1和Caki-2細胞株中E2F1的表達,使用pcDNA-3.1-空質粒和pcDNA-3.1-HA-E2F1分別轉染腎透明細胞癌細胞株786-O和A498,然后通過流式細胞儀及MTS法分別檢測兩組的細胞周期及細胞增殖能力的變化;③使用pcDNA-3.1-空質粒和pcDNA-3.1-HA-E2F1分別轉染腎透明細胞癌細胞株786-O

4、和A498,通過劃痕實驗及transwell方法檢測786-O和A498細胞株的遷移和侵襲能力的變化。結果:①E2F1的mRNA水平在腎透明細胞癌手術標本中表達明顯升高(p=0.0002),相應的蛋白水平對比與mRNA變化一致,E2F1的mRNA水平在不同年齡、性別組間無統(tǒng)計學差異(p>0.05),而在組織學分級、T分期、臨床分期和大血管浸潤(腎靜脈和下腔靜脈)與否組間有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。相關性分析顯示在腎透明細胞癌組織中E2

5、F1的mRNA水平(△CT值)與病理組織學分級(相關系數r=-0.470,p<0.001)、T分期(相關系數r=-0.455,p=0.001)、臨床分期(相關系數r=-0.467,p<0.001)、大血管浸潤呈負相關(相關系數r=-0.475,p<0.001);②在兩株腎透明細胞癌細胞系786-O和A498中轉染pcDNA-3.1-HA-E2F1后,腫瘤增殖能力上升(p<0.05),786-O細胞株中,pcDNA-3.1-HA-E2F1

6、實驗組的G1期細胞比例是51.97±1.66％,而對照組中的G1期細胞比例是65.47±1.11%和64.20±0.71%(p<0.001),在A498細胞株中,pcDNA-3.1-HA-E2F1實驗組的G1期細胞比例是53.22±0.58%,而對照組中的G1期細胞比例是62.65±0.79%和63.47±0.86%(p<0.001);③E2F1在腎透明細胞癌腫瘤細胞株786-O、A498、Caki-2、Caki-1的蛋白表達水平比HK

7、C細胞株高(p值均<0.05),在腎透明細胞癌細胞系786-O和A498中轉染pcDNA-3.1-HA-E2F1后,腫瘤遷移和侵襲能力增強(p值均<0.05)。E2F1下游的靶基因金屬蛋白酶MMP2和MMP9的mRNA表達水平顯著上升。結論:①轉錄因子E2F1異常高表達可能與腎透明細胞癌的發(fā)生和惡性進展有關;②E2F1通過促使細胞周期G1向S期進展影響腫瘤細胞的增殖;③E2F1過表達促進腎透明細胞癌細胞株遷移和侵襲能力。金屬蛋白酶MMP