USP22和SIRT1蛋白在腎透明細(xì)胞癌中的表達及其作用.pdf

1、第一部分:USP22和SIRT1蛋白在腎透明細(xì)胞癌中的表達以及臨床意義
　　背景和目的:腎透明細(xì)胞癌為多基因異常相關(guān)腫瘤。USP22是近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤干細(xì)胞新標(biāo)記蛋白，而且可能與腫瘤相關(guān)蛋白SIRT1具有相互作用，因此，我們研究腎透明細(xì)胞癌中USP22和SIRT1蛋白的表達情況以及它們與臨床病理之間的聯(lián)系，評判USP22和SIRT1在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:基因表達網(wǎng)站上分析USP22，SIRT1在腎透明細(xì)

2、胞癌中的表達情況，Western blot比較腎癌細(xì)胞株與正常腎細(xì)胞株中USP22，SIRT1蛋白的表達差異，利用我們院2006-2007年間的腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本制作組織芯片，采用免疫組織化學(xué)方法檢測USP22，SIRT1的亞細(xì)胞定位及其表達情況，結(jié)合臨床病理參數(shù)及電話隨訪的生存情況，分析USP22，SIRT1的表達及其臨床意義。
　　結(jié)果:
　　1、相較于正常腎組織及腎細(xì)胞系，USP22，SIRT1在腎透明細(xì)胞癌的人體標(biāo)本和

3、腫瘤細(xì)胞系中表達較高。
　　2、成對的臨床樣本中顯示，腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生伴隨著USP22，SIRT1高表達。
　　3、在腎透明細(xì)胞癌的病理標(biāo)本中，共定位于細(xì)胞核的USP22，SIRT1的表達與患者的年齡（是否大于60歲），腫瘤浸潤深度，遠處轉(zhuǎn)移，臨床TNM分期，病理分級緊密相關(guān)。
　　4、總共可利用的376例臨床標(biāo)本中，患者的隨訪率為64.36％(242/376)，其中，總存活201例（健康存活185例，腫瘤轉(zhuǎn)移16例

4、），死亡41例。獲訪的患者中TNM臨床分期的Ⅰ期68.2％(165/242)，Ⅱ期7.4％(18/242)，Ⅲ期19.8％(48/242)，Ⅳ期4.5％(11/242)?？?76例手術(shù)中有根治性腎切除手術(shù)308例（開放手術(shù)266例，腔鏡下42例），腎部分切除術(shù)58例（開放手術(shù)57例，腔鏡下1例），腎根治+靜脈切開取栓5例，腎根治切除術(shù)+腎上腺切除術(shù)3例，左腎根治+脾臟切除1例，右腎癌根治+右半結(jié)腸切除1例。患者的迄今存活率和無病生存率分

5、別為83.1％(201/242)，76.4％(185/242)，患者的5年存活率和無病生存率分別為83.5％(202/242)，76.9％(186/242)。
　　5、Log-rank單因素分析顯示患者的生存與患者年齡（是否大于60歲），腫瘤大小（直徑是否小于8cm），腫瘤浸潤深度，腫瘤是否有遠處轉(zhuǎn)移，腫瘤的TNM臨床分期，腫瘤分級，USP22和SIRT1的表達密切相關(guān)。
　　6、Cox多因素回歸分析則發(fā)現(xiàn)病理分級，USP2

6、2的表達和腫瘤的浸潤深度是腎透明細(xì)胞癌預(yù)后的獨立危險因素，而與患者生存相關(guān)的年齡，腫瘤大小，腫瘤浸潤深度，腫瘤的臨床TNM分期，SIRT1等則是非獨立的預(yù)后因素。
　　7、相關(guān)性分析顯示:在成對的46例標(biāo)本中，無論是在正常組織還是在癌組織，USP22的表達都與SIRT1具有中度的相關(guān)性(r=0.586/0.711，p＜0.01)。而在總的376例樣本中，USP22與SIRT1也具有密切的相關(guān)性(r=0.379，p＜0.01)。

7、r>　　結(jié)論:共定位細(xì)胞核的USP22與SIRT1表達具有相關(guān)性，而且都與腎透明細(xì)胞癌惡性程度密切相關(guān)，暗示腎癌預(yù)后獨立危險因素USP22可能協(xié)同腎癌預(yù)后影響因素的SIRT1參與了腎透明細(xì)胞癌的發(fā)病過程。它們具有病程預(yù)測和作為治療分子靶點的潛在價值。
　　第二部分:USP22協(xié)同SIRT1參與腎透明細(xì)胞癌發(fā)病過程的分子機制
　　背景和目的:第一部分實驗證明了共定位于細(xì)胞核的USP22和SIRT1具有表達上的相關(guān)性，而且與腎透

8、明細(xì)胞癌臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，它們協(xié)同參與了腎透明細(xì)胞癌的發(fā)病過程，在此，研究它們相關(guān)性的原因以及參與腫瘤發(fā)生的分子機理。
　　方法:構(gòu)建含有USP22和SIRT1及其截短、失活突變體USP22C185S、SIRT1H363Y、shUSP22、shSIRT1的質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染USP22和SIRT1后采用共聚焦免疫熒光顯色確定USP22，SIRT1的亞細(xì)胞定位，采用免疫共沉淀分析USP22與SIRT1之間的結(jié)合情況，蛋白水平上的修飾關(guān)系，

9、報告基因?qū)嶒炋接懶揎椇髮Φ鞍坠δ艿挠绊憽；虺聊琔SP22和SIRT1后分別采用CCK-8和流式細(xì)胞術(shù)判斷細(xì)胞增殖，凋亡情況，并利用western blot驗證其原因，研究USP22和SIRT1蛋白對腫瘤生長的影響。
　　結(jié)果:USP22，SIRT1，失活突變體USP22C185S，SIRT1H363Y以及USP22，SIRT1截短的編碼蛋白都定位于細(xì)胞核中。USP22與SIRT1具有相互作用，并且USP22可以對SIRT1進行去