MiR-346對前列腺癌細胞遷移、侵襲能力的影響及其可能機制的探討.pdf

1、目的：控制前列腺癌細胞中 miR-346的表達，研究促進及抑制 miR-346的表達對去勢抵抗型人前列腺癌DU-145、PC-3細胞運動、遷移及侵襲能力的影響，初步探討干擾 miR-346表達對前列腺癌細胞上皮及間質(zhì)標記物表達變化的影響并探討其可能的作用機制。
　　方法：以去勢抵抗型人前列腺癌DU145、PC-3細胞株為研究對象，分別轉(zhuǎn)染人工合成的miR-346的模擬物(miR-346 mimics)及反義體(inhibitor

2、miR-346)，在細胞中過表達或沉默miR-346，劃痕實驗及Transwell遷移、侵襲實驗研究改變miR-346表達后DU145、PC-3細胞運動、遷移及侵襲能力的改變，并使用Western blot法在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）陽性的DU-145細胞中檢測miR-346表達改變后上皮標志物 E-cadherin以及間質(zhì)標記物 N-cadherin的蛋白表達變化。mi

3、R-346可以調(diào)控TGFβ/smad信號通路里SMAD3、SMAD4的表達，采取Q-PCR法及Western blot法分別在mRNA及蛋白水平檢測SMAD3、SMAD4在過表達或沉默miR-346后的表達變化。
　　結(jié)果：劃痕實驗結(jié)果顯示：miR-346 mimics組細胞運動能力明顯增強，inhibitor miR-346組細胞運動能力顯著降低。細胞遷移實驗結(jié)果顯示：DU145細胞NC組從上室遷移過膜的細胞數(shù)為57±5.7個，

4、miR-346 mimics組192±18.5個，inhibitor NC組53±4.3個，inhibitor miR-346組16±1.3個；PC-3細胞NC組從上室遷移過膜的細胞數(shù)為29±2.7個，miR-346 mimics組90±8.5個，inhibitor NC組34±3.0個，inhibitor miR-346組12±0.9個。在DU145和PC-3細胞中miR-346 mimics組與NC組相比，細胞遷移能力明顯增強，in

5、hibitor miR-346組與inhibitor NC相比，細胞遷移能力顯著減弱，實驗組與對照組之間的差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。細胞侵襲實驗顯示：DU145細胞NC組從上室侵襲過膜的細胞數(shù)為38±3.7個，miR-346 mimics組98±8.5個，inhibitor NC組37±3.3個，inhibitor miR-346組7±0.5個；PC-3細胞NC組從上室侵襲過膜的細胞數(shù)為33±2.8個，miR-346 mimic

6、s組90±8.2個，inhibitor NC組35±3.1個，inhibitor miR-346組2±0.1個。在DU145和PC-3細胞中miR-346 mimics組與NC組相比，細胞侵襲能力明顯增強，inhibitor miR-346組與inhibitor NC相比，細胞侵襲能力顯著減弱，實驗組與對照組之間的差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對EMT陽性的DU145細胞株進一步研究，Western blot結(jié)果顯示，miR-346

7、 mimics組上皮標志物 E-cadherin的蛋白表達降低；間質(zhì)標記物 N-cadherin的蛋白表達升高，inhibitor miR-346組上皮標志物E-cadherin的蛋白表達增高；間質(zhì)標記物N-cadherin的蛋白表達降低。對兩種細胞進一步研究，Q-PCR和Western blot結(jié)果顯示miR-346 mimics組SMAD3、SMAD4的mRNA及蛋白表達降低，inhibitor miR-346組SMAD3、SMAD

8、4的mRNA及蛋白表達升高。
　　結(jié)論：去勢抵抗型人前列腺癌DU145、PC-3細胞的運動、遷移及侵襲的能力與細胞中 miR-346表達水平高度相關；上皮標記物 E-cadherin的蛋白表達與 miR-346的表達呈負相關，間質(zhì)標記物N-cadherin的蛋白表達與miR-346的表達呈正相關，即miR-346促進前列腺癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，進而促進前列腺癌細胞的遷移及侵襲能力；miR-346抑制smad3及smad4的表達，可能