miR-219-5p靶向e-鈣粘蛋白促進人前列腺癌細胞遷移侵襲.pdf

1、microRNAs是一類在多種真核生物中發(fā)現(xiàn)的大小約21-25nts內(nèi)源性非編碼RNA，通過與靶基因3'UTR互補序列特異性結(jié)合，導致翻譯抑制或(和)mRNA降解，調(diào)節(jié)基因的表達。microRNAs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色，在臨床腫瘤疾病診斷治療方面具有應用前景。E-鈣粘蛋白是重要的細胞間粘附分子，由基因CDH1編碼，在抑制腫瘤細胞的遷移侵襲過程中發(fā)揮著極其重要的作用。本研究在全基因組深度測序的基礎上，發(fā)現(xiàn)了人前列腺癌細胞中差

2、異表達miR-219-5p和細胞粘附分子E-鈣粘蛋白。我們運用細胞水平和動物體內(nèi)方法研究miR-219-5p在前列腺癌細胞中過表達或表達下調(diào)以后對腫瘤細胞遷移侵襲能力的影響，初步探討了其作用機制并驗證CDH1是否是miR-219-5p的靶基因。
　　[目的]
　　1.研究前列腺癌細胞系中miR-219-5p和E-鈣粘蛋白的表達水平，并探討二者之間的相互關系;
　　2.分析過表達miR-219-5p后CDH1 mRNA與

3、E-鈣粘蛋白表達水平的變化以及對P69細胞體外遷移侵襲能力的影響，探討miR-219-5p在前列腺癌轉(zhuǎn)移中的作用;
　　3.分析下調(diào)miR-219-5p后CDH1 mRNA與E-鈣粘蛋白表達水平的變化以及對M12細胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響，探討miR-219-5p在前列腺癌轉(zhuǎn)移中的作用。
　　[方法]
　　應用real time PCR檢測前列腺癌細胞系P69和M12中miR-219-5p和E-鈣粘蛋白的表達情況;利用分子

4、克隆技術構(gòu)建miR-219-5p慢病毒表達載體，包裝病毒顆粒，將病毒顆粒感染P69和M12細胞，獲得miR-219-5p過表達和表達下調(diào)的細胞模型;采用軟瓊脂克隆形成試驗觀察過表達和下調(diào)miR-219-5p后P69和M12細胞增殖能力的變化;應用RT-CA DP觀察過表達和下調(diào)miR-219-5p后P69和M12細胞遷移侵襲能力的變化;采用細胞3D培養(yǎng)觀察過表達和下調(diào)miR-219-5p后P69和M12細胞基質(zhì)侵襲能力;應用流式細胞術和

5、Western Blot鑒定miR-219-5p過表達后E-鈣粘蛋白的表達情況;采用雙熒光素酶報告基因分析系統(tǒng)驗證CDH1 mRNA是miR-219-5p的直接靶標。
　　[結(jié)果]
　　1.轉(zhuǎn)移性前列腺癌細胞系中miR-219-5p表達上調(diào)，而E-鈣粘蛋白表達下調(diào)甚至缺失;
　　2.成功構(gòu)建了P69-miR-219-5p過表達和表達下調(diào)的M12-anti-miR-219-5p穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系;
　　3.在P69細胞

6、中過表達miR-219-5p以后，CDH1 mRNA以及E-鈣粘蛋白表達下降，P69-miR-219-5p細胞的遷移侵襲能力增強;
　　4.在M12細胞中下調(diào)miR-219-5p以后，M12-anti-miR-219-5p細胞的體外增殖能力減弱，在體的轉(zhuǎn)移能力被有效抑制。
　　[結(jié)論]
　　1.miR-219-5p具有致癌基因的功能，在低轉(zhuǎn)移的上皮樣細胞P69中低表達，而在高轉(zhuǎn)移的前列腺癌細胞系M12中高表達;