愛媛類芽孢桿菌南京分離株的鑒定及其體內(nèi)外的抑菌活性.pdf

1、類芽孢桿菌能分泌多種胞外抗菌物質(zhì)，對多種致病菌有抑制活性，能顯著提高動(dòng)物的抗病性，隨著科學(xué)研究的深入，類芽孢桿菌抗菌特性的應(yīng)用將會(huì)得到重視。
　　 采用雙層瓊脂平板法，從30份水樣和2份豬糞樣品中分離出12株具有抑菌活性的細(xì)菌，通過抗菌譜，篩選出一株分離自健康豬糞的類芽孢桿菌，名為NJ2008。通過菌落、菌體形態(tài)觀察、生理生化反應(yīng)及16S rDNA序列分析，同時(shí)結(jié)合用微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)驗(yàn)證，鑒定這株菌屬于愛媛類芽孢桿菌屬（Pae

2、nibacillus ehimensis）。此菌細(xì)胞桿狀，革蘭氏染色成陰性，菌體中具有中生的橢園形芽孢，芽孢囊膨大；在普通瓊脂平板上菌落乳白色，半透明，邊緣光滑，呈白蠟狀；在肉湯培養(yǎng)基中出現(xiàn)混濁且形成薄菌膜，最適生長溫度為37℃，最佳生長酸堿條件pH6。
　　 用雙層瓊脂平板法檢測愛媛類芽孢桿菌，抗菌譜表明其對腸道致病菌有明顯體外抑菌活性，能夠抑制大腸桿菌和鼠傷寒沙門菌的生長，也能夠抑制水產(chǎn)動(dòng)物病害的不動(dòng)桿菌，遲緩愛德華菌和嗜水

3、氣單胞菌。除此之外，對革蘭氏陽性細(xì)菌，豬鏈球菌2型、豬鏈球菌9型和馬鏈球菌獸疫亞種也有抑制作用。
　　 鑒于愛媛類芽孢桿菌NJ2008體外能夠抑制鼠傷寒沙門菌，以人工感染的小鼠鼠傷寒沙門菌病為模型，分析愛媛類芽孢桿菌NJ2008對小鼠的急性毒性，并評估其預(yù)防和治療小鼠感染沙門菌的效果。愛媛類芽孢桿菌NJ2008分別以107cfu/mL、108cfu/mL、109cfu/mL給小鼠灌胃，試驗(yàn)組和空白對照組小鼠均健康，證明 NJ20

4、08對小鼠無毒性。以109cfu/mL愛媛類芽孢桿菌NJ2008預(yù)防人工感染鼠傷寒沙門菌小鼠，小鼠存活率為8/10（80％），空白對照組存活率僅為4/10（40％），試驗(yàn)組和空白對照組的差異顯著，顯示愛媛類芽孢桿菌NJ2008對小鼠感染鼠傷寒沙門菌有良好的預(yù)防效果。分別用106cfu/mL，107cfu/mL，108cfu/mL和109cfu/mL愛媛類芽孢桿菌NJ2008治療人工感染鼠傷寒沙門菌小鼠，小鼠存活率分別為4/10（40％）

5、，4/10（40％），4/10（40％）和6/10（60％），空白對照組的存活率為4/10（40％），試驗(yàn)組和空白對照組無差異，治療效果不佳。以上結(jié)果表明，愛媛類芽孢桿菌NJ2008能夠抑制致病菌，可以作為一種微生物制劑用于預(yù)防動(dòng)物的細(xì)菌疾病。
　　 通過PCR擴(kuò)增，從質(zhì)粒pFPV25.1中荻取綠色熒光蛋白基因片段，克隆入pP43NMK的多克隆區(qū)，構(gòu)建成pP43NMK-GFP，通過限制性核酸內(nèi)切酶KpnⅠ與HindⅢ對所建質(zhì)粒進(jìn)