2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  Gitelman綜合征(GS)由SLC12A3基因突變導(dǎo)致其編碼的腎臟遠(yuǎn)曲小管鈉氯協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白(NCC)功能失活,是一種遺傳性失鹽性腎病,臨床表現(xiàn)為低血鉀、低血鎂、代謝性堿中毒、低尿鈣和腎素-血管緊張素Ⅱ-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)活化,但血壓正常。目前臨床上尚缺乏簡單易行的診斷方法,限制了該病診治水平的提高。
  本研究擬建立GS患者臨床、基因和生理功能(氫氯噻嗪試驗)診斷方法,結(jié)合體外基因突變功能試驗,驗證中國人

2、群GS患者的常見和部分新突變的致病性;觀察GS患者正常血鎂亞型和糖耐量低減的表型。觀察GS患者全身和局部RAAS活化及可能機(jī)制,探討維生素D及其類似物抑制腎素的作用。
  方法:
  1.制定臨床癥狀標(biāo)準(zhǔn)問卷、收集病例資料,提取外周血DNA,行SLC12A3基因外顯子直接測序,氫氯噻嗪實驗評估患者NCC蛋白功能狀態(tài)??偨Y(jié)中國人高頻和新發(fā)突變,構(gòu)建野生型和突變型NCC質(zhì)粒,體外轉(zhuǎn)錄成cRNA并進(jìn)行顯微注射,用爪蟾卵母細(xì)胞表達(dá)體

3、系定量驗證新突變功能。
  2.檢測GS患者血、尿電解質(zhì)水平(對照組為64位健康受試者)。行3h OGTT實驗結(jié)果評價GS患者的胰島素敏感性和胰島分泌功能,對照組為健康受試者(n=20)和糖尿病患者(n=20)。
  3.分析低鎂血癥和正常血鎂GS患者的臨床特點、NCC功能試驗差異,免疫組化法檢測腎活檢組織鎂離子轉(zhuǎn)運蛋白—瞬時受體電位陽離子通道亞家族M成員6(TRPM6)表達(dá)水平。
  4.RAAS臥立位實驗測定GS患

4、者全身血漿腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ和醛固酮水平,免疫組化和熒光雙染觀察GS患者和胚胎腎組織中腎素產(chǎn)生細(xì)胞再募集現(xiàn)象。
  5.急性和慢性注射VDR激動劑,觀察血漿腎素活性、腎組織腎素mRNA和蛋白的變化,觀察VDR基因敲除小鼠腎素、環(huán)氧酶2(COX2)、NCC和TRPM6水平。體外實驗觀察VDR是否在球旁器顆粒細(xì)胞(JG)或致密斑(MD)細(xì)胞表達(dá),并探究活性維生素D對低氯誘導(dǎo)的MD細(xì)胞COX2高表達(dá)的影響。
  結(jié)果

5、:
  1.60位確診的GS患者常見的臨床表現(xiàn)為肌無力(79.7%)、乏力(55.9%)、手足痙攣或抽搐(45.8%)、心悸(40.7%)、感覺異常(35.6%)和夜尿增多(33.9%),且男性GS患者的臨床表現(xiàn)較女性患者重。
  2.54種突變中含14種新突變,中國GS患者突變頻率高于5%的突變?yōu)門60M、D486N和R913Q。體外功能實驗證明突變型NCC(T60M,L215F, D486N,N534K,Q617R和R9

6、28C)攝取22Na+的能力均顯著低于野生型,且突變型NCC轉(zhuǎn)運活性的下降是由轉(zhuǎn)運子特異性突變所致。
  3.建立了簡化氫氯噻嗪實驗診斷方法,確定了中國人群正常值范圍,用于臨床證實GS患者NCC蛋白功能受損。使用氫氯噻嗪前后氯排泄分?jǐn)?shù)凈增加值來診斷GS的ROC曲線下面積為0.983,取2.86作為截點,以基因診斷為金標(biāo)準(zhǔn),該實驗診斷低鉀、堿中毒GS患者的靈敏度為95%,特異度為95.2%。
  4.OGTT實驗結(jié)果提示GS患

7、者存在糖代謝和胰島素功能異常,與健康對照相比,GS患者表現(xiàn)為血糖和胰島素分泌高峰延遲,血糖曲線下面積增加,胰島素分泌敏感性指數(shù)(ISSI)降低,而胰島素敏感性指標(biāo)(ISOGTT、QUICKI和HOMA-IR)無顯著差異。
  5.正常血鎂患者臨床表現(xiàn)較低鎂血癥患者輕,對氫氯噻嗪的反應(yīng)好于低鎂血癥患者。NCC和TRPM6同時表達(dá)在腎臟遠(yuǎn)曲小管。正常血鎂患者(n=2)遠(yuǎn)曲小管TRPM6表達(dá)水平與輕微病變對照組(n=14)無顯著差異(7

8、.82±5.23% vs.8.63±2.67%,p>0.05),而低鎂血癥GS患者(n=10) TRPM6表達(dá)水平顯著低于對照組(4.96±1.88%vs.8.63±2.67%,p=0.001)。
  6.88%的GS患者存在全身RAAS活化,GS患者(n=18)腎組織球旁器增生,腎素表達(dá)水平顯著高于輕微病變對照組,球旁器和微動脈區(qū)域均發(fā)現(xiàn)了腎素與α-Actin共表達(dá)現(xiàn)象,重現(xiàn)了胚胎階段腎組織的情況。
  7.活性維生素D及

9、其類似物均不能抑制急性腎素分泌,但腹腔注射兩周其類似物--RO化合物可抑制腎素mRNA表達(dá),且不升高血鈣。VDR基因敲除小鼠血鈣降低,腎素mRNA表達(dá)增加2.9倍。MD細(xì)胞表達(dá)VDR,活性維生素D不能抑制低氯誘導(dǎo)的MD細(xì)胞COX2高表達(dá)。
  結(jié)論:
  建立了GS臨床、基因和生理功能試驗(氫氯噻嗪試驗)診斷模型。氫氯噻嗪實驗是一種簡單、經(jīng)濟(jì)、可靠的GS診斷和鑒別診斷方法。新發(fā)現(xiàn)了14種突變,明確了中國GS患者的高頻突變包括

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