β2微球蛋白電化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的建立.pdf

1、目前我國尿毒癥患者已經(jīng)超過一百萬人，β2微球蛋白是存在于尿毒癥患者體內(nèi)的中分子，長期積累β2微球蛋白會使關(guān)節(jié)周圍組織、消化道和心血管等部位發(fā)生各種并發(fā)癥，嚴(yán)重者可死于充血性心力衰竭。在健康人血清中β2微球蛋白濃度相對穩(wěn)定，一般為1.5-3mg/L，但在尿毒癥病人血清中其含量可以達(dá)到20-50mg/L，有時甚至達(dá)到100mg/L。早期診斷的目的在于早發(fā)現(xiàn)早治療，通過對特定標(biāo)志物的診斷了解病情，制定最佳的治療方案，從而達(dá)到治愈患者的目的。早

2、期腎衰竭對患者的治療是一個至關(guān)重要的時期，因此建立一種方便快速、高靈敏度的檢測方法對預(yù)防、控制腎衰竭的發(fā)病有至關(guān)重要的作用。本論文搭建了實驗室電化學(xué)發(fā)光檢測平臺，用于β2微球蛋白的檢測，具體的工作內(nèi)容主要從以下幾個方面展開:
　　(1)磁性石墨電極的制作
　　建立了一種新的磁性工作電極的制作方法，并對該電極導(dǎo)電性能和磁吸附性能進(jìn)行測試，結(jié)果表明石墨棒電極尺寸為直徑5mm，高3mm時有較高的磁感應(yīng)強(qiáng)度，達(dá)到235.7mT;石墨

3、電極具有良好的導(dǎo)電性能，并對磁性微球有較好的捕獲效果。
　　(2)磁性微球表面抗體固載方法的建立和優(yōu)化
　　磁性微球具有大的比表面積，能大量固載抗體，并在外加磁場作用下和溶液快速分離等特點(diǎn)。本章以磁性微球為載體建立抗體固載方法，通過ELISA方法檢測β2微球蛋白的含量。由結(jié)果可知，0.1mg的磁性微球最多可以結(jié)合200μL10μg/mL小鼠抗β2微球蛋白抗體，以磁性微球為載體的ELISA方法檢測β2微球蛋白線性范圍為0.01

4、μg/mL-10μg/mL，檢測靈敏度達(dá)到0.01μg/mL。
　　(3)以磁性微球為載體檢測β2微球蛋白電化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的建立
　　以磁性微球為載體，通過免疫反應(yīng)將β2微球蛋白和熒光分子標(biāo)記到微球表面，利用磁性石墨電極捕獲磁性微球，采用循環(huán)伏安法測量發(fā)光信號。經(jīng)實驗驗證，在pH=7的0.1mol/L的PBS緩沖液，掃描速度150mV/s的條件下可以檢測到最大發(fā)光信號。
　　通過論文研究，構(gòu)建了實驗室β2微球蛋白