斜帶石斑魚生長激素的促生長作用及胰島素樣生長因子Ⅰ在畢赤酵母中的表達(dá).pdf

1、魚生長激素(fGH)是由魚腦垂體間葉細(xì)胞分泌的用于調(diào)節(jié)魚體生長發(fā)育的一種多肽激素。不少研究證明，基因重組的fGH與天然的fGH一樣具有生物活性，通過口服能被魚體吸收，具有很強(qiáng)的促生長作用。 本文分為兩部分的內(nèi)容：重組斜帶石斑魚GH對吉富羅非魚的促生長作用和IGF-Ⅰ在畢赤酵母中的表達(dá)。首先是利用已構(gòu)建的GH高效表達(dá)酵母菌株，其分泌的重組GH經(jīng)硫酸銨沉淀后拌在鰻魚粉狀飼料里面，投喂吉富羅非魚，歷時八周，結(jié)果表達(dá)，重組GH能夠明顯

2、地促進(jìn)吉富羅非魚的生長(p＜0.01)，到投喂實驗結(jié)束的時候，組成型表達(dá)低濃度組、高濃度組和誘導(dǎo)型表達(dá)低濃度組、高濃度組的增重率分別比對照組高出100％、88.80％、67.30％和40.90％，說明所表達(dá)的重組GH具有生長活性。而且，無論是組成型表達(dá)還是誘導(dǎo)型表達(dá)，低濃度組的促生長效果都比高濃度組更加明顯。投喂實驗結(jié)束后，進(jìn)一步用半定量RT-PCR分別分析外源GH對肝臟的IGF-ⅠmRNA和垂體的GHmRNA的表達(dá)量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，

3、實驗組IGF-ⅠmRNA的表達(dá)量明顯比對照組高(p＜0.05)，而GHmRNA的表達(dá)量則沒有明顯的差異(p＞0.05)。從而證實了GH的促生長效果主要是通過IGF-Ⅰ而起作用。 為了進(jìn)一步研究魚類的GH-IGF-Ⅰ生長調(diào)控軸的作用機(jī)理，本文還構(gòu)建和表達(dá)了斜帶石斑魚IGF-Ⅰ。為了提高重組IGF-Ⅰ的表達(dá)量，首先是對IGF-Ⅰ成熟肽進(jìn)行酵母密碼偏好性改造，在不改變其氨基酸序列的前提下，把稀有密碼子全部替換成酵母中最常用的密碼子。