非純培養(yǎng)物細(xì)菌蛋白酶DNA的克隆與表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文根據(jù)蛋白酶數(shù)據(jù)庫MEROPS已作的蛋白酶家族氨基酸聯(lián)配圖，從絲氨酸蛋白酶S8家族中選擇具有代表性的枯草桿菌類蛋白酶，從GenBank中獲取相應(yīng)的DNA序列，設(shè)計并合成了10條引物。 從自然界先后采集了21份樣品，使用脫脂牛奶平板富集所有的胞外蛋白酶產(chǎn)生菌，將它們混合培養(yǎng)并提取了12個總DNA。用6對引物在降落PCR(Touchdown PCR，TD-PCR)條件下對12個總DNA樣品分別進(jìn)行了蛋白酶編碼序列的擴(kuò)增，獲得47個片

2、段。選取19個800-1200bp長的擴(kuò)增片段進(jìn)行測序，測序結(jié)果及同源性分析顯示：8個為蛋白酶DNA片段；3個能在數(shù)據(jù)庫找到同源但非蛋白酶基因序列；其余8個在數(shù)據(jù)庫中沒有找到同源基因。對8個蛋白酶片段編碼序列的進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，它們實際上是4種不同的蛋白酶DNA序列。其中有同1對引物擴(kuò)增得到的DNA序列差異性達(dá)到32％，說明使用PCR方法從混合菌中獲得新蛋白酶基因是可行的。 克隆到的蛋白酶DNA片段G2與堿性蛋白酶E(GenBankN

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