川明參多糖的提取工藝及其免疫活性研究.pdf

1、川明參屬傘形科川明參屬，在形態(tài)上與明黨參相近，是我國(guó)特有的單種屬植物，主要分布在四川，多為栽培，其干燥根為四川常用道地中藥材及滋補(bǔ)食品。研究表明，具有潤(rùn)肺化痰、和胃、生津、解毒等功效，主治肺熱咳嗽、熱病傷陰，為滋陰要藥。實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，川明參多糖硫（Chuanmingshen ViolaceumPolysaccharides，CVP）酸化后具有抗病毒作用，本次研究對(duì)川明參多糖提取工藝、體內(nèi)外免疫活性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。
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2、川明參多糖提取工藝研究本研究采用苯酚-硫酸法和DNS法相結(jié)合對(duì)多糖定量;CVP最佳提取工藝通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)進(jìn)行確定。結(jié)果顯示:CVP的最佳提取工藝為提取溫度為100℃，提取時(shí)間為4h，料液比為1∶30，粉碎粒度為80目。結(jié)果表明，本研究得到的提取、純化干燥方法高效、簡(jiǎn)便、成本低，且采用本方法純化干燥得到多糖純度達(dá)93.85％。
　　2.川明參多糖及其硫酸化物對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活性的影響本研究采用四甲基偶氮唑鹽(3-(4，

3、5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltet-razolium bromide，MTT)法檢測(cè)不同濃度的CVP及SCVP對(duì)靜息期細(xì)胞、伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A，ConA)處理細(xì)胞、脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）處理細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比較，CVP各濃度對(duì)靜息期細(xì)胞和LPS處理細(xì)胞的增殖均無顯著影響，但與ConA具有協(xié)同增殖作用;SCVP能活化淋

4、巴細(xì)胞促進(jìn)其顯著增殖，與ConA和LPS具有協(xié)同增殖作用，并有一定的量效關(guān)系。結(jié)果表明，CVP及SCVP能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖，且SCVP對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞具有有絲分裂原性。
　　3.川明參多糖及其硫酸化物對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠免疫水平的影響本研究采用CY來誘導(dǎo)小鼠免疫低下;免疫器官變化情況通過測(cè)定胸脾指數(shù)來衡量;CVP及SCVP不同劑量對(duì)靜息期細(xì)胞、ConA處理細(xì)胞、LPS處理細(xì)胞增殖活性的變化情況運(yùn)用MTT法進(jìn)行檢測(cè);血

5、清IFN-γ，和IL-2采用ELISA試劑盒檢測(cè)。結(jié)果顯示:與模型組相比CVP和SCVP各試驗(yàn)劑量組均能顯著(P＜0.05)提高免疫低下小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù); CVP和SCVP各試驗(yàn)劑量3種處理方式脾臟淋巴細(xì)胞光密度(OD)值均顯著(P＜0.05)高于模型組;與模型組相比CVP和SCVP各試驗(yàn)劑量組均能顯著提高免疫低下小鼠血清細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的水平。結(jié)果表明，CVP和SCVP可以通過提高免疫低下小鼠免疫器官指數(shù)、各處理脾

6、臟淋巴細(xì)胞增殖和血清IFN-γ和IL-2含量，從而提高機(jī)體的免疫力。4.川明參多糖對(duì)雞新城疫疫苗免疫應(yīng)答的影響本研究對(duì)7日齡雞分組、注射新城疫疫苗、連續(xù)7天按要求口服CVP，于14日齡、21日齡、28日齡采集相關(guān)樣品，通過對(duì)血清抗體水平、紅細(xì)胞免疫功能、T淋巴細(xì)胞增殖活性和T淋巴細(xì)胞亞群的測(cè)定，進(jìn)而評(píng)價(jià)CVP對(duì)疫苗免疫應(yīng)答的影響。結(jié)果顯示:在第14日齡和28日齡時(shí)，CVP給藥各組抗體效價(jià)均顯著高于(P＜0.05)對(duì)照組;在第14日齡和2

7、1日齡時(shí)，CVP給藥各組外周血淋巴細(xì)胞增殖率均顯著高于(P＜0.05)對(duì)照組;在第14日齡和28日齡時(shí)，CVP給藥組的紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率均顯著(P＜0.05)高于對(duì)照組;在第21日齡和28日齡時(shí)，CVP給藥組的紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率均顯著(P＜0.05)低于對(duì)照組;在第21日齡和28日齡時(shí)，CVP中劑量組的T淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8+比率顯著(P＜0.05)高于對(duì)照組。結(jié)果表明，CVP能增強(qiáng)疫苗免疫后的體液免疫的水平，且延長(zhǎng)了疫