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
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文檔簡(jiǎn)介
1、海參是一種在中國沿海的重要海洋食品,含有多種功能性成分及多種保健功能。近年來,海參多糖逐步在海參保健功能的研究中占有了重要地位,研究重點(diǎn)包括抗腫瘤、增強(qiáng)免疫等。在海參的加工過程中,海參精作為海參的副產(chǎn)物之一,經(jīng)常會(huì)被丟棄,這樣既造成了浪費(fèi),也污染了環(huán)境。因此,本課題選擇海參中具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的仿刺參中的海參精為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行多糖的提取和活性研究。首先對(duì)其進(jìn)行不同蛋白酶酶解的工藝優(yōu)化:?jiǎn)我蛩貙?shí)驗(yàn)和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn),然后采用不同的方法對(duì)酶解得到的仿
2、刺參精粗多糖(SCSCP)進(jìn)行逐步的分離純化得到四個(gè)組分(SCSPA1、SCSPA2、SCSPB1、SCSPB2),最后對(duì)各分離組分分別進(jìn)行理化性質(zhì)的測(cè)定及抗腫瘤和抗氧化活性初步研究,以期為海參精副產(chǎn)物中多糖的生產(chǎn)及應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。結(jié)果如下:
1.仿刺參精多糖的提取
選擇兩種應(yīng)用廣泛的蛋白酶,以多糖得率為指標(biāo),將添酶量、酶解溫度和酶解時(shí)間作為重要的影響因子,首先進(jìn)行了兩種單酶各個(gè)因素取值范圍的確定,然后進(jìn)
3、行了響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),最后對(duì)雙酶酶解添加比例進(jìn)行了篩選實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明:木瓜蛋白酶單酶的提取率較高,添酶量為3%、酶解溫度為49℃、酶解時(shí)間為6 h時(shí),其得率可達(dá)10.64‰。
2.仿刺參精多糖的純化及理化性質(zhì)分析
多糖SCSCP經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow柱層析得到SCSPA1和SCSPA2兩個(gè)主要組分,對(duì)SCSPA1進(jìn)行葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析純化得到SCSPB1,對(duì)SCS
4、PA2進(jìn)行SephadexG-200純化得到SCSPB2,分別對(duì)分離純化到的各組分進(jìn)行理化性質(zhì)的分析。
結(jié)果:首先,在化學(xué)組成方面,SCSCP、SCSPA1、SCSPA2、SCSPB1和SCSPB2的多糖含量分別為31.07%、40.03%、45.27%、44.62%、50.73%;蛋白含量分別為21.18%、19.43%、7.52%、10.36%、6.61%;糖醛酸含量分別為3.81%、3.14%、1.73%、3.50%、2
5、.97%;硫酸根含量分別為12.39%、10.07%、17.71%、12.66%、21.33%。其次,紫外和紅外光譜掃描結(jié)果表明五種多糖組分在多糖的特征吸收區(qū)域內(nèi)均有吸收峰。最后,在單糖組成方面,甘露糖、氨基葡萄糖、乳糖、半乳糖和巖藻糖均被SCSPB1和SCSPB2所含有,但兩者所含單糖含量有所差異,而氨基半乳糖鹽酸鹽只被SCSPB2所特有。
采用MTT法對(duì)仿刺參精多糖及其純化組分進(jìn)行Hela和HepG2腫瘤細(xì)胞增殖能力的體外
6、抑制試驗(yàn)表明:Hela細(xì)胞和HepG2細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間不同SCSCP抑制效果也不同,五種多糖抑制細(xì)胞生長(zhǎng)強(qiáng)弱順序依次為SCSPB2>SCSPA2>SCSPB1>SCSPA1>SCSCP。當(dāng)SCSPB2濃度為10 mg/mL時(shí),對(duì)培養(yǎng)72 h的Hela細(xì)胞和HepG2細(xì)胞的抑制率分別為85.63%和88.46%,表明具有顯著的體外抗腫瘤活性。
4.仿刺參精多糖的抗氧化活性研究
本文對(duì)分離組分進(jìn)行了:DPPH·、羥基自由基
7、(OH·)和超氧陰離子自由基(O2-·)清除活性的測(cè)定。結(jié)果表明在三種自由基清除上,粗多糖及其純化組分都發(fā)揮了不同的作用。所有組分都在O2-·的清除實(shí)驗(yàn)上呈現(xiàn)出微弱的能力,但不同組分之間有一定的區(qū)別;在其余兩個(gè)自由基清除實(shí)驗(yàn)中各個(gè)多糖組分均呈現(xiàn)出較強(qiáng)的能力,且互相之間也有差別。其中,對(duì)三種自由基SCSPB2的能力最強(qiáng),在DPPH·、OH·和O2-·的清除試驗(yàn)中,當(dāng)SCSPB2的添加濃度為4 mg/mL時(shí),清除率分別達(dá)到66.64%、52
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