哺乳動物上皮細(xì)胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用.pdf

1、登革病毒（dengue virus, DENV）屬于黃病毒科(Flavivirade)黃病毒屬(Flavivirus)，是目前世界上分布最廣泛的由蚊類傳播的蟲媒病毒。截至目前，還沒有安全有效的疫苗或者抗病毒藥物來治療登革病毒引起的疾病。鞘糖脂是由神經(jīng)酰胺和糖類構(gòu)成的糖脂分子，普遍分布于真核細(xì)胞的膜類結(jié)構(gòu)上。最近，有研究發(fā)現(xiàn)鞘糖脂通過調(diào)節(jié)病毒感染宿主細(xì)胞的多個步驟來參與病毒感染。然而，鞘糖脂在登革病毒感染中的具體作用仍然不明確。在本研究中

2、，我們采用小鼠黑色素瘤 B16細(xì)胞和缺失鞘糖脂的突變體GM95細(xì)胞來研究鞘糖脂在登革病毒感染中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型B16細(xì)胞相比，缺失鞘糖脂的GM95細(xì)胞對登革病毒極不敏感：GM95細(xì)胞中病毒的復(fù)制水平，細(xì)胞上清中的活病毒量，都比野生型對照 B16細(xì)胞中顯著降低。用抑制鞘糖脂合成的抑制劑大豆皂苷或者PPMP來處理B16細(xì)胞，或者用RNAi的方法干擾B16細(xì)胞中三種主要鞘糖脂合成酶(mt3gal5, ma4GalT or mb3GnT

3、)，都能抑制登革病毒感染。相反地，在GM95細(xì)胞中加入外源鞘糖脂GM3，能部分的恢復(fù)登革病毒感染。同時，我們發(fā)現(xiàn)B16細(xì)胞感染登革病毒后，代表性的酸性鞘糖脂GM3的含量顯著上升，鞘糖脂合成酶基因的表達也顯著上調(diào)。這些結(jié)果提示了鞘糖脂在登革病毒感染上皮細(xì)胞B16過程中發(fā)揮作用。
　　為了研究鞘糖脂參與登革病毒感染細(xì)胞的具體機制，我們用病毒基因定量 PCR測定和羅丹明染料標(biāo)記登革病毒等方法，來研究B16和GM95細(xì)胞對登革病毒的結(jié)合和

4、內(nèi)吞效率。結(jié)果表明，GM95細(xì)胞結(jié)合和內(nèi)吞登革病毒的能力與B16細(xì)胞相比并無顯著性差異。進一步實驗發(fā)現(xiàn)，鞘糖脂對登革病毒的RNA復(fù)制起重要作用。向B16和GM95細(xì)胞中轉(zhuǎn)染DNA型登革病毒復(fù)制子后，復(fù)制子在B16細(xì)胞中的復(fù)制水平顯著地高于GM95細(xì)胞。此外，在登革病毒感染的B16細(xì)胞胞質(zhì)中，病毒復(fù)制復(fù)合物的組成成分之一非結(jié)構(gòu)蛋白NS4A與鞘糖脂GM3在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜區(qū)域有部分共定位。這些實驗數(shù)據(jù)表明，鞘糖脂不參與上皮細(xì)胞對登革病毒的結(jié)合和內(nèi)吞