成年大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的體外培養(yǎng).pdf

1、　　近年來，神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)已成為研究的熱點(diǎn)，并在體外已成功地分離和培養(yǎng)了神經(jīng)干細(xì)胞，為人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病，特別是神經(jīng)退行性病變，如帕金森綜合癥、髓鞘疾病、脊髓損傷、老年癡呆等疾病提供理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)以SD大鼠為材料，無菌條件下體外分離并培養(yǎng)海馬神經(jīng)細(xì)胞，利用臺(tái)盼藍(lán)染色、Nissl染色、透射電鏡、MTT等方法鑒定、檢測(cè)神經(jīng)元，得到如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：　　1.以健康、發(fā)育正常的220g-300gSD大鼠為材料，采用機(jī)械法或EDTA-胰酶消化法分離

2、海馬神經(jīng)細(xì)胞，并優(yōu)化體外培養(yǎng)條件，以4×105個(gè)/mL的密度接種于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液，在37℃、5﹪CO2的條件下可培養(yǎng)14～24d，細(xì)胞生長(zhǎng)良好?！　?.EGF對(duì)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)具有明顯作用，能促進(jìn)神經(jīng)元存活及突起生長(zhǎng)，尤其對(duì)軸突生長(zhǎng)的促進(jìn)作用是顯著的。神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化與EGF濃度呈線性相關(guān)，培養(yǎng)液中添加20ng/mL的EGF為最佳濃度，其形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形成更為復(fù)雜的、高度的枝狀突起，與對(duì)照組之間差異極顯著(P＜0.01)。1

3、0ng/mLEGF和100ng/mLEGF組與對(duì)照組相比，差異顯著(P＜0.05)，但二者之間差異不顯著(P＞0.05)。　　3.不同濃度Vc對(duì)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)具有一定的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，較高濃度200nmol/LVc能顯著促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的存活數(shù)、細(xì)胞突起數(shù)目、長(zhǎng)度、胞體面積均顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)；而高濃度Vc組(2000nmol/L)顯著減少細(xì)胞的存活數(shù)，可以引起細(xì)胞凋亡?！　?.以兩種不同基質(zhì)多聚左旋賴氨酸(PLL

4、)和鼠尾膠原及其分別作為基質(zhì)及其聯(lián)合應(yīng)用處理神經(jīng)細(xì)胞，結(jié)果表明，PLL組的細(xì)胞貼壁時(shí)間短，但分散較為均勻，聚集成團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象較為少見，細(xì)胞脫落時(shí)間早。鼠尾膠原組的貼壁細(xì)胞相互聚集成團(tuán)生長(zhǎng)，細(xì)胞貼壁時(shí)間長(zhǎng)，細(xì)胞脫落時(shí)間晚。PLL與鼠尾膠原聯(lián)合應(yīng)用組的貼壁細(xì)胞形態(tài)基本同PLL組，細(xì)胞分散比較均勻，少有成團(tuán)現(xiàn)象，胞體有明亮的光暈，長(zhǎng)出細(xì)短突起，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，絕大部分長(zhǎng)出突起且突起較長(zhǎng)并與相鄰的細(xì)胞形成纖維交織成網(wǎng)狀。培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，細(xì)胞脫落時(shí)