卡馬西平對(duì)成年大鼠額葉及小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:卡馬西平(Carbamazepine,CBZ)為三環(huán)類抗驚厥劑,臨床上主要用于抗驚厥及抗癲癇,是精神運(yùn)動(dòng)性發(fā)作的首選藥物之一,另外還可用于治療三叉神經(jīng)痛、舌咽神經(jīng)痛和躁狂-抑郁癥等[1]。由于其臨床應(yīng)用較為廣泛,對(duì)于多個(gè)系統(tǒng)的不良反應(yīng)也日益受到重視,其中神經(jīng)系統(tǒng)的不良反應(yīng)如頭暈、共濟(jì)失調(diào)、嗜睡、行為沖動(dòng)和異?；糜X等在各種文獻(xiàn)中屢有報(bào)道[2-4]。本實(shí)驗(yàn)通過研究長(zhǎng)期應(yīng)用CBZ與成年大鼠額葉及小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡的相關(guān)性,從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度分

2、析其在臨床應(yīng)用中出現(xiàn)的部分不良反應(yīng),同時(shí)為該藥的進(jìn)一步研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和實(shí)驗(yàn)方向。
　　 方法:
　　 1、分組及藥物干預(yù):健康10周齡雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只(體重200±20g)。按隨機(jī)分組的方法將大鼠平均分為6組,每組5只。分組情況如下:
　　 A組:長(zhǎng)療程高劑量CBZ組,CBZ以500mg/kg/d溶于生理鹽水(2ml/100g)給大鼠灌胃,灌胃30天;
　　 B組

3、:長(zhǎng)療程低劑量CBZ組,CBZ以125mg/kg/d溶于生理鹽水(2ml/100g)給大鼠灌胃,灌胃30天;
　　 C組:長(zhǎng)療程生理鹽水組,生理鹽水以2ml/100g/d給大鼠灌胃,灌胃30天;
　　 D組:短療程高劑量CBZ組,CBZ以500mg/kg/d溶于生理鹽水(2ml/100g)給大鼠灌胃,灌胃15天;
　　 E組:短療程低劑量CBZ組,CBZ以125mg/kg/d溶于生理鹽水(2ml/100g)給大鼠

4、灌胃,灌胃15天;
　　 F組:短療程生理鹽水組,生理鹽水以2ml/100g/d給大鼠灌胃,灌胃15天;
　　 2、動(dòng)物取材:10％水合氯醛麻醉成功后,4％的戊二醛從左心室進(jìn)行灌注1.5小時(shí),迅速取材大鼠額葉及小腦部分,放入4％的多聚甲醛固定,常規(guī)梯度乙醇脫水,二甲苯透明,浸臘,包埋。
　　 3、凋亡檢測(cè):選取額葉和小腦常規(guī)連續(xù)冠狀切片,片厚5μm。用原位末端標(biāo)記法(TUNEL法)檢測(cè)標(biāo)本內(nèi)凋亡細(xì)胞,免疫組化法檢

5、測(cè)標(biāo)本內(nèi)凋亡相關(guān)基因bax及bc1-2的蛋白表達(dá)。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件,用方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P＜0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn),認(rèn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義。多組間均數(shù)用One-WayANOVA檢驗(yàn)比較,各組均數(shù)間兩兩比較用SNK檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果:
　　 1、藥物干預(yù)后各組額葉細(xì)胞凋亡情況的比較:
　　 1.1 TUNEL法檢測(cè)凋亡陽性細(xì)胞:各組均可見稀疏而散在的TUNEL陽性細(xì)胞

6、,對(duì)各組間均數(shù)進(jìn)行兩兩比較P＞0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.2免疫組化法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因bax及bc1-2的陽性表達(dá):各組標(biāo)本中Bax及Bc1-2均有少量表達(dá),表現(xiàn)為細(xì)胞核、細(xì)胞漿著棕色。統(tǒng)計(jì)表達(dá)陽性細(xì)胞,各組間均數(shù)兩兩比較P＞0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)算各組Bax及Bc1-2表達(dá)陽性細(xì)胞比值Bax/Bc1-2,各組比值進(jìn)行兩兩比較P＞0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、藥物干預(yù)后各組小腦細(xì)胞凋亡情況的

7、比較:
　　 2.1 TUNEL法檢測(cè)凋亡陽性細(xì)胞:A組中可見TUNEL陽性細(xì)胞明顯增多,有的呈片狀分布;D組中也可見較多TUNEL陽性細(xì)胞;其余各組中均可見散在的TUNEL陽性細(xì)胞。A組與C組相比,P＜0.01,二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B組與C組相比,P＞0.05,二者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;D組與F組相比,P＜0.05,二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;E組與F組相比,P＞0.05,二者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A組與D組相比,P＜0.

8、05,二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.2免疫組化法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Bax及Bc1-2的陽性表達(dá):A組中可見Bax表達(dá)陽性細(xì)胞明顯增多;D組中也可見較多Bax表達(dá)陽性細(xì)胞;其它各組Bax、Bc1-2表達(dá)陽性細(xì)胞呈稀疏而散在分布。各組Bax陽性表達(dá)以及Bax/Bc1-2比值經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均顯示:A組與C組相比,P＜0.01,二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B組與C組相比,P＞0.05,二者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;D組與F組相比,P＜0.

9、05,二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;E組與F組相比,P＞0.05,二者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;A組與D組相比,P＜0.05,二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1、灌服CBZ未引起成年大鼠額葉神經(jīng)細(xì)胞過度凋亡現(xiàn)象;
　　 2、灌服較高劑量CBZ可導(dǎo)致成年大鼠小腦神經(jīng)細(xì)胞中Bax表達(dá)明顯增高,小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加,提示CBZ可能通過增加Bax的表達(dá)引起細(xì)胞凋亡;且凋亡程度隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)加重;
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