HCGP-39基因真核表達系統(tǒng)的構(gòu)建和初步的功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、HCGP-39屬于哺乳動物幾丁質(zhì)酶家族，但不具有幾丁質(zhì)酶活性。近年來的臨床研究發(fā)現(xiàn)，HCGP-39基因表達的上調(diào)與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移與預(yù)后相關(guān)，提示其可能參與腫瘤細胞與周圍基質(zhì)之間的相互作用。而在其他一些研究工作中，有報道該蛋白所屬幾丁質(zhì)酶家族的某些成員具有生長因子樣作用。迄今為止，HCGP-39基因的具體生理功能仍不清楚。為此，我們構(gòu)建了含HCGP-39基因全長cDNA編碼序列的真核表達載體，采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染正常人肝細胞株L02和肝癌細胞

2、株SMMC-7721，并對瞬時轉(zhuǎn)染后的細胞周期變化進行觀察，以期了解該基因在細胞周期調(diào)控過程中可能起到的作用。 目的：構(gòu)建含HCGP-39基因全長cDNA編碼序列的真核表達載體并對其功能進行研究； 方法：從新鮮人乳腺癌組織樣品中提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，用特異引物擴增獲得目的DNA片段，連接載體后測序。測序正確后，構(gòu)建含目的片段的真核表達載體，轉(zhuǎn)染肝細胞L02和肝癌細胞SMMC-7721，流式細胞術(shù)檢測

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