版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、垂體腺瘤是常見的顱內(nèi)良性腫瘤之一,發(fā)病率居顱內(nèi)腫瘤第二位,約占顱內(nèi)腫瘤的10%-15%,并呈現(xiàn)逐年增加的趨勢。隨著腫瘤不斷生長,可壓迫蝶鞍區(qū)周圍結(jié)構(gòu),如視神經(jīng)、海綿竇、腦底動脈、下丘腦等,甚至累及額葉、腦干,而導(dǎo)致嚴(yán)重的功能障礙。同時,腫瘤生長還可導(dǎo)致垂體激素分泌紊亂。按照外周血激素水平,垂體腺瘤分為無功能型垂體腺瘤(NFPA)和功能型垂體腺瘤,包括:泌乳素腺瘤(PRL)、促腎上腺皮質(zhì)激素腺瘤(Cushing)、生長激素腺瘤(GH)、促
2、甲狀腺激素腺瘤(TSH)、促性腺激素腺瘤(PGA)以及混合激素分泌腺瘤等。其中垂體促腎上腺皮質(zhì)激素腺瘤(ACTH-PAs)臨床又稱為庫欣病(Cushing's Disease)是一種伴有促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)分泌的功能型垂體腺瘤約占全部垂體腺瘤的14%,約占庫欣綜合征(Cushing's syndrome)的70%。該病在歐美國家的發(fā)病率為39/百萬,我國尚缺乏大規(guī)模流行病學(xué)數(shù)據(jù)。由于該病的診斷主要基于實(shí)驗(yàn)室激素水平檢查、患者臨床
3、癥狀體征、影像學(xué)檢查及病理學(xué)免疫組織化學(xué)檢測,因此對于庫欣病的早期診斷十分困難,容易誤診?;颊叱3S捎诟咂べ|(zhì)醇血癥而引起多種嚴(yán)重并發(fā)癥,如高血壓、糖尿病、高脂血癥、骨質(zhì)疏松及精神抑郁等就診。在治療上,對于絕大多數(shù)庫欣病人而言,經(jīng)鼻蝶竇入路垂體腺瘤切除術(shù)仍然是臨床首選治療方法,放射治療以及帕瑞肽、酮康唑等藥物治療常作為難治性庫欣病的術(shù)后輔助治療方式。雖然文獻(xiàn)報道外科手術(shù)成功率在65%~90%,但是由于腫瘤自身生物學(xué)行為的不同及術(shù)者操作水平
4、的差異,腫瘤復(fù)發(fā)率為3%~47%,平均復(fù)發(fā)時間為16~49個月,復(fù)發(fā)患者預(yù)后較差,病死率高。近年來針對庫欣病的分子水平研究主要集中在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、腫瘤的侵襲性及激素分泌等方面,但目前對于庫欣病的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚,因此臨床上亟待尋找有助于庫欣病診斷、治療及判斷預(yù)后的潛在靶點(diǎn)。
本研究通過新一代測序技術(shù)(Next generation sequencing,NGS),對垂體ACTH腺瘤全轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行高通量測序,在轉(zhuǎn)錄組水平篩
5、選相關(guān)差異表達(dá)基因和microRNA;并與患者臨床表型進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,探究垂體ACTH腺瘤所致臨床表型的分子機(jī)理,此外,考慮到血清游離miRNA具有作為腫瘤標(biāo)志物的潛力,篩選差異表達(dá)的血清miRNA,并對差異表達(dá)的血清miRNA進(jìn)行了驗(yàn)證,為深入研究庫欣病的發(fā)病機(jī)制,篩選診斷標(biāo)志物提供依據(jù)。以期最終實(shí)現(xiàn)垂體腺瘤患者個性化治療。
第一部分 基于全轉(zhuǎn)錄組深度測序的垂體ACTH腺瘤mRNA差異表達(dá)分析
目的:通過新一代高通量
6、測序技術(shù)對垂體ACTH腺瘤行轉(zhuǎn)錄組測序,探究垂體ACTH腺瘤與瘤周正常垂體組織間的差異表達(dá)基因,以期揭示腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中可能的存在分子機(jī)制,并為后續(xù)的microRNA組學(xué)研究提供完整的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
方法:收集單一中心68例垂體ACTH患者的組織標(biāo)本(腫瘤及瘤周正常垂體),20例無功能垂體腺瘤,18例生長激素型垂體腺瘤和8例泌乳素型垂體腺瘤,同時采集患者相關(guān)臨床信息。運(yùn)用新一代測序技術(shù)對9對配對樣本(腫瘤和瘤周正常垂體組織
7、)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組深度測序,通過生物信息學(xué)分析,獲取垂體ACTH腺瘤基因差異表達(dá)譜。進(jìn)一步對篩選出的差異表達(dá)基因行GO term和PATHWAY分析,并挑選差異表達(dá)顯著基因進(jìn)行驗(yàn)證和功能機(jī)制研究,探究其在垂體ACTH腺瘤中可能存在的分子調(diào)節(jié)機(jī)制。
結(jié)果:通過對垂體ACTH腺瘤mRNA-seq數(shù)據(jù)做生物信息學(xué)分析,我們篩選出166個上調(diào)的差異表達(dá)基因和288個下調(diào)的差異表達(dá)基因,發(fā)現(xiàn)了庫欣病腫瘤發(fā)生發(fā)展、激素分泌和腫瘤侵襲性等相關(guān)的基
8、因和相關(guān)信號通路。并從中挑選未經(jīng)報道的TIMP3基因做進(jìn)一步驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)與瘤周正常垂體組織相比TIMP3在mRNA和蛋白水平的表達(dá)在各類型垂體腺瘤中顯著下調(diào),并與腫瘤的體積、侵襲性、Ki-67等顯著相關(guān)。
結(jié)論:通過建立垂體ACTH腺瘤基因的差異表達(dá)譜,揭示庫欣病可能存在的發(fā)病機(jī)制及臨床表型相關(guān)機(jī)制,并為后續(xù)的庫欣病microRNA組學(xué)分子靶向研究提供理論基礎(chǔ)。
第二部分 基于全轉(zhuǎn)錄組深度測序的垂體ACTH腺瘤micr
9、oRNAs差異表達(dá)分析
目的:運(yùn)用新一代測序技術(shù),建立垂體ACTH腺瘤microRNA差異表達(dá)譜。鑒定相關(guān)microRNA在垂體ACTH腺瘤組織中及患者血清中的表達(dá)情況,以期作為診斷庫欣病和預(yù)后監(jiān)測的分子標(biāo)志物。
方法:經(jīng)蝶竇入路手術(shù)治療庫欣病患者,術(shù)中收集垂體ACTH腺瘤患者腫瘤標(biāo)本及瘤周垂體組織共9對。運(yùn)用Illumina Genome AnalyzerⅡx行全轉(zhuǎn)錄組microRNA測序,結(jié)合生物信息學(xué)分析建立垂
10、體ACTH腺瘤差異表達(dá)的microRNA譜。并在55例腫瘤組織和15例瘤周正常垂體組織中運(yùn)用熒光定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證,將篩選得到的microRNA在197例病人和120例健康人的血清中運(yùn)用熒光定量PCR行驗(yàn)證檢測,并進(jìn)行靶基因的預(yù)測及與第一部分mRNA-seq結(jié)果做關(guān)聯(lián)分析,在組織水平作相關(guān)基因功能驗(yàn)證,得到一組microRNA panel作為針對庫欣病診斷和預(yù)后觀察的分子標(biāo)志物。
結(jié)果:所有9對樣品建庫成功,Illumina
11、Genome AnalyzerⅡx深度測序平均讀取10M/樣品。我們發(fā)現(xiàn),垂體ACTH腺瘤與瘤周垂體相比,有67個microRNA顯著差異表達(dá)。通過對測序數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),垂體ACTH腺瘤相對瘤周正常垂體組織比較,根據(jù)Fold change>2,Recurrence≥5,發(fā)現(xiàn)67個差異表達(dá)的microRNA,其中包括39個上調(diào)的microRNA和28個下調(diào)的microRNA,在腫瘤和瘤周正常垂體組織中驗(yàn)證得到6個上調(diào)(miR-9-5p,mi
12、R-9-3p,miR-190b,miR-137,miR-885-5p,miR-592)和1個下調(diào)的mir-551b-3p,并且在患者和正常人的血清中進(jìn)行檢測,也得到了1個下調(diào)的mir-551b-3p,其表達(dá)水平與組織中一致。受試者工作特征曲線分析顯示,mir-551b-3p對于庫欣病的診斷具有較高的敏感性和特異性。血清中mir-551b-3p的表達(dá)水平與患者的腫瘤體積,血皮質(zhì)醇和ACTH水平顯著相關(guān)。
結(jié)論:研究結(jié)果表明mic
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 銀杏轉(zhuǎn)錄組測序及葉片與胚珠數(shù)字基因表達(dá)譜分析.pdf
- 榛子花芽轉(zhuǎn)錄組文庫的Solexa測序及冷調(diào)節(jié)基因的表達(dá)譜分析.pdf
- 基于RNA測序技術(shù)的馬氏珠母貝珍珠囊轉(zhuǎn)錄組及數(shù)字基因表達(dá)譜分析.pdf
- 轉(zhuǎn)錄組測序深度對表達(dá)基因檢測影響的初步研究.pdf
- 垂體泌乳素腺瘤組織中相關(guān)microRNA的表達(dá)研究.pdf
- 基于轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析紫穗槐菌根差異表達(dá)基因.pdf
- 細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴mRNA測序及表達(dá)譜分析.pdf
- 中華蜜蜂轉(zhuǎn)錄組測序及雌性蜜蜂基因表達(dá)分析.pdf
- 基于轉(zhuǎn)錄組測序的杉木磷轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的鑒定及表達(dá)分析.pdf
- 擬南芥種子發(fā)育過程轉(zhuǎn)錄組深度測序數(shù)據(jù)的分析.pdf
- 垂體ACTH腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)及治療后不緩解的診斷和療效分析.pdf
- 川芎根莖、葉轉(zhuǎn)錄組測序及分析.pdf
- 基于轉(zhuǎn)錄組測序的銀屑病基因表達(dá)研究.pdf
- 垂體ACTH腺瘤經(jīng)蝶術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)因素分析—臨床回顧及免疫組化研究.pdf
- 松墨天牛氣味結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄組測序分析及表達(dá)分析.pdf
- 萊蕪豬和大白豬背最長肌miRNA與mRNA轉(zhuǎn)錄組測序及特征分析.pdf
- 基于轉(zhuǎn)錄組測序的拉薩祼裂尻魚基因差異表達(dá)分析及分子標(biāo)記開發(fā).pdf
- 尼羅羅非魚轉(zhuǎn)錄組與數(shù)字基因表達(dá)譜分析及Siglecs基因的表達(dá)研究.pdf
- 轉(zhuǎn)hrf2基因油菜抗病防衛(wèi)研究及其基于高通量測序技術(shù)的全基因組表達(dá)譜分析.pdf
- 菜粉蝶不同發(fā)育階段mRNA與miRNA轉(zhuǎn)錄組的高通量測序分析.pdf
評論
0/150
提交評論