何首烏二苯乙烯苷的新制備工藝及生物活性研究.pdf

1、何首烏為蓼科植物何首烏（Polygonum multiflorumThunb.）的干燥塊根。在臨床上何首烏不僅常被用作滋補類的中藥，而且還可作為食療保健品。二苯乙烯苷是何首烏的主要藥效成分，但其對酪氨酸酶活性的影響說法不一，且二苯乙烯苷對酪氨酸酶活性影響的作用機制尚未明確。我們必須找到一種簡單有效的二苯乙烯苷的純化工藝，并探討其對酪氨酸酶活性的影響及對酪氨酸酶活性影響的作用機制。
　　研究目的：
　　利用DPPH自由基清除法

2、來檢測何首烏經(jīng)高速逆流色譜分離所得各組分的抗氧化活性，優(yōu)化何首烏二苯乙烯苷的純化工藝，探討何首烏二苯乙烯苷對酪氨酸酶活性的影響及其作用機制。
　　研究方法：
　　1.利用高速逆流色譜法一步分離何首烏粗提液，得到的各組分分別進行DPPH自由基清除實驗，比較各組分的抗氧化活性。
　　2.運用高速逆流色譜法建立簡單可行的高純度二苯乙烯苷的純化工藝。
　　3.利用多巴速率氧化法探討何首烏二苯乙烯苷對酪氨酸酶活性的影響。<

3、br>　　4.對二苯乙烯苷與酪氨酸酶的反應進行酶促動力學分析，得到酶促動力學參數(shù)，建立林貝氏雙倒數(shù)圖，探討二苯乙烯苷對酪氨酸酶的作用機制。
　　結(jié)果：
　　1.利用高速逆流色譜色譜法分離何首烏粗提液，得到了四種組分，其中3號組分抗DPPH自由基活性最大，經(jīng)HPLC鑒定其為二苯乙烯苷，且純度大于95％。
　　2.利用粗提液堿化法和高速逆流色譜法建立了一種簡單可行的高純度二苯乙烯苷純化工藝，二苯乙烯苷的純度可達99.15%

4、。
　　3.多巴速率氧化法顯示低濃度二苯乙烯苷對酪氨酸酶活性有促進作用（其 IC50為0.013mg/ml、0.018mg/ml、0.007mg/ml），而高濃度二苯乙烯苷對酪氨酸酶活性有抑制作用（其IC50為1.177mg/ml、1.046mg/ml、1.203mg/ml）。
　　4.通過二苯乙烯苷與酪氨酸酶的酶促動力學分析，得到了酶促動力學參數(shù)，制作了林貝氏雙倒數(shù)圖，分析二苯乙烯苷對酪氨酸酶活性影響的作用機制可能為混合性