何首烏二苯乙烯苷的新制備工藝及生物活性研究.pdf

1、何首烏為蓼科植物何首烏（Polygonum multiflorumThunb.）的干燥塊根。在臨床上何首烏不僅常被用作滋補(bǔ)類的中藥，而且還可作為食療保健品。二苯乙烯苷是何首烏的主要藥效成分，但其對(duì)酪氨酸酶活性的影響說法不一，且二苯乙烯苷對(duì)酪氨酸酶活性影響的作用機(jī)制尚未明確。我們必須找到一種簡(jiǎn)單有效的二苯乙烯苷的純化工藝，并探討其對(duì)酪氨酸酶活性的影響及對(duì)酪氨酸酶活性影響的作用機(jī)制。
　　研究目的：
　　利用DPPH自由基清除法

2、來檢測(cè)何首烏經(jīng)高速逆流色譜分離所得各組分的抗氧化活性，優(yōu)化何首烏二苯乙烯苷的純化工藝，探討何首烏二苯乙烯苷對(duì)酪氨酸酶活性的影響及其作用機(jī)制。
　　研究方法：
　　1.利用高速逆流色譜法一步分離何首烏粗提液，得到的各組分分別進(jìn)行DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)，比較各組分的抗氧化活性。
　　2.運(yùn)用高速逆流色譜法建立簡(jiǎn)單可行的高純度二苯乙烯苷的純化工藝。
　　3.利用多巴速率氧化法探討何首烏二苯乙烯苷對(duì)酪氨酸酶活性的影響。<

3、br>　　4.對(duì)二苯乙烯苷與酪氨酸酶的反應(yīng)進(jìn)行酶促動(dòng)力學(xué)分析，得到酶促動(dòng)力學(xué)參數(shù)，建立林貝氏雙倒數(shù)圖，探討二苯乙烯苷對(duì)酪氨酸酶的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.利用高速逆流色譜色譜法分離何首烏粗提液，得到了四種組分，其中3號(hào)組分抗DPPH自由基活性最大，經(jīng)HPLC鑒定其為二苯乙烯苷，且純度大于95％。
　　2.利用粗提液堿化法和高速逆流色譜法建立了一種簡(jiǎn)單可行的高純度二苯乙烯苷純化工藝，二苯乙烯苷的純度可達(dá)99.15%

4、。
　　3.多巴速率氧化法顯示低濃度二苯乙烯苷對(duì)酪氨酸酶活性有促進(jìn)作用（其 IC50為0.013mg/ml、0.018mg/ml、0.007mg/ml），而高濃度二苯乙烯苷對(duì)酪氨酸酶活性有抑制作用（其IC50為1.177mg/ml、1.046mg/ml、1.203mg/ml）。
　　4.通過二苯乙烯苷與酪氨酸酶的酶促動(dòng)力學(xué)分析，得到了酶促動(dòng)力學(xué)參數(shù)，制作了林貝氏雙倒數(shù)圖，分析二苯乙烯苷對(duì)酪氨酸酶活性影響的作用機(jī)制可能為混合性