芽孢桿菌溶血素BL的檢測及B905hblA基因的克隆.pdf

1、芽孢桿菌由于能夠形成芽孢，可在高滲、高酸、高堿、高溫、高寒的環(huán)境下良好生長，其作為生防菌株已經(jīng)應(yīng)用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。但由于部分芽孢桿菌可能產(chǎn)生溶血素，對人類及動物存在潛在危險，同時菌株的安全性問題受到重視。 為了研究生防菌株在生產(chǎn)應(yīng)用中的安全性，本研究以本實驗室分離的、具有促生、防病和改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的植物內(nèi)生芽孢桿菌為對象，用PCR方法對蠟樣芽孢桿菌B901、B902、B903、B904、B905、B906、B907、B836、B9

2、10，枯草芽孢桿菌B908、w-3、T-4，多粘類芽孢桿菌m-1和地衣芽孢桿菌w-2溶血素BL基因進(jìn)行檢測，結(jié)果表明8株蠟樣芽孢桿菌含有溶血素BL全部基因hblA，hblC、hblD，枯草芽孢桿菌、多粘類芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌檢測到部分溶血素BL基因；通過血平板培養(yǎng)的方法檢測，結(jié)果表明只有含有hblA基因的菌株才會產(chǎn)生溶血環(huán)，從而為生產(chǎn)安全性菌株提供參考。 本實驗以B.cereus 905為研究對象，克隆了B905 hblA基因

3、閱讀框，經(jīng)測序與Genebank登錄的Bacillus cereus ATCC 14579菌株同源性達(dá)97％以上。利用同源重組的方法對其溶血素BLhblA基因缺失，結(jié)果顯示突變后的菌株在血平板上仍然產(chǎn)生溶血環(huán)并且大小與野生菌株一樣，未發(fā)生改變，其原因可能是由于該菌溶血素基因結(jié)構(gòu)與Handelsman構(gòu)建所用的菌株Bacillus cereusUW85有一定的差異，或者是由于突變位點在閱讀框內(nèi)后端，未能真止破壞其表達(dá)，為構(gòu)建新型安全性菌株