AXIN1基因的突變與結腸癌和膠質瘤發(fā)生之間的聯(lián)系.pdf

1、Wnt和JNK信號傳導途徑由一系列癌基因和抑癌基因編碼的蛋白質組成，各種蛋白間彼此聯(lián)系、相互制約構成復雜的信號傳遞網絡，在細胞增殖、分化、運動、黏附及機體發(fā)育等過程中起著重要調節(jié)作用，該網絡調節(jié)關系的紊亂與腫瘤的發(fā)生有密切關系。Axin是一個體軸發(fā)育抑制因子，也是非常重要的腫瘤抑制因子，它有一系列結合位點，可與這兩種信號傳導途徑中的多個重要成員相互結合形成復合物，在復合物中與其它因子一起共同調節(jié)兩種信號傳導系統(tǒng)的平衡。Axin還參與p5

2、3、TGF-β等重要信號傳導途徑的調控。正因為Axin在Wnt、JNK、p53等多種信號傳導途徑中參與細胞生長、增殖、癌變等重要細胞命運的調節(jié)過程，所以Axin與人類癌癥之間的聯(lián)系引起了人們廣泛的研究興趣。 腫瘤是一種嚴重危害人體健康的常見疾病。其中結腸癌是導致死亡的主要癌癥之一，膠質瘤是中樞神經系統(tǒng)最常見的腫瘤。本論文對54例結腸癌組織和56例膠質瘤組織進行了分析，首先通過免疫組化的方法鑒定β-catenin與Axin兩種蛋白

3、水平在這兩種腫瘤組織中是否存在異常。然后我們根據(jù)AXIN1基因的DNA序列，設計了覆蓋AXIN1基因所有外顯子序列的23對特異PCR引物，通過PCR-SSCP的方法進一步篩選抑癌基因AXIN1可能存在的突變。進而構建這些突變體的哺乳動物表達載體，轉染到人類細胞中，通過熒光素酶報告基因轉錄活性的檢測、免疫共沉淀、免疫激酶反應等生物化學、分子生物學和細胞生物學的實驗手段，鑒定這些突變是否影響了Axin的正常功能，最終確定AXIN1基因的突變

4、與結腸癌和膠質瘤發(fā)生之間的聯(lián)系。 本論文研究發(fā)現(xiàn)： 1、正常結腸組織中β-catenin染色陰性，沒有β-catenin的積累；37例結腸癌組織中有59.4﹪(22/37)的組織中存在β-catenin的積累，包括胞漿的積累和轉移至胞核的積累；β-catenin的積累在不同級別的結腸癌中都有很大比例的存在，說明β-catenin的積累在結腸癌發(fā)生中起著重要作用。 2、正常結腸組織中Axin染色陽性；37例結腸癌有

5、62.2﹪(23/37)的組織中Axin免疫組化染色陰性；隨著腫瘤級別的升高，Axin陰性率呈上升的趨勢，說明Axin在結腸癌起著腫瘤抑制因子的作用。 3、54例結腸癌中AXIN1基因存在14.8﹪(8/54)的有義/無義點突變，表明AXIN1基因在結腸癌中存在一定的突變發(fā)生頻率；75﹪(6/8)的AXIN1基因發(fā)生突變的組織中有β-catenin的積累，表明結腸癌中AXIN1基因的突變與β-catenin的積累有關。

6、4、正常膠質瘤組織中膠質細胞β-catenin染色陰性，沒有β-catenin的積累；56例膠質瘤中僅有3.5﹪(2/56)的組織中有β-catenin的積累，表明膠質瘤中β-catenin的積累不是導致膠質瘤發(fā)生的主要因素。 5、膠質瘤癌旁組織中正常膠質細胞Axin染色陰性；Axin在高達35.7﹪(20/56)的膠質瘤膠質細胞中染色陽性，表明Axin水平異常與膠質瘤的發(fā)生有關。 6、29例膠質瘤中AXIN1基因存在高

7、達34.4﹪(10/29)的有義點突變，而且多發(fā)生在DIX結構域，表明Axin的DIX結構域在膠質瘤發(fā)生中的重要性；高級別的膠質瘤Axin染色陽性率高，發(fā)生突變的頻率也高，說明在膠質瘤中AXIN1基因突變與Axin蛋白水平增高和膠質瘤的發(fā)生有關。 7、結腸癌和膠質瘤中由于AXIN1基因發(fā)生點突變導致Axin功能發(fā)生改變的比率都高達80﹪以上，通過Wnt、JNK或者p53信號途徑，不同程度、不同方式地影響Axin的正常功能。