釀酒酵母GSH 2基因的克隆和原核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、還原型谷胱甘肽（L-Glutathione）簡(jiǎn)稱為GSH，是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸構(gòu)成的三肽，其中谷氨酸是以γ-羧基與半胱氨酸形成肽鍵。GSH存在于所有生物細(xì)胞中，在酵母和動(dòng)物中含量較高，在植物體內(nèi)含量較少。谷胱甘肽在抗氧化、保護(hù)生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的巰基、結(jié)合自由基保護(hù)細(xì)胞、解除外源性有毒物質(zhì)的毒性和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)等起到重要作用，對(duì)植物的抗旱、抗重金屬等也有重要意義。GSH在醫(yī)學(xué)上可以作為解毒劑用于有機(jī)溶劑等中毒治療，同時(shí)在抗氧化和防止皮

2、膚老化方面都有廣泛運(yùn)用，在食品工業(yè)，GSH作為生物活性添加劑被積極用于開發(fā)保健食品。 谷胱甘肽在酵母菌中的合成由γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH1)和谷胱甘肽合成酶(GSH2)催化完成，酵母、擬南芥等生物體內(nèi)的GSH合成酶系相繼被克隆和分析。在目前研究的大部分生物體內(nèi)γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶是GSH合成中的限速酶，受GSH的反饋抑制，但已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在某些大腸桿菌菌株中卻是GSH2做為GSH合成的關(guān)鍵酶，此外，在某些逆境條件下GSH1

3、是否可作為GSH合成途徑中的關(guān)鍵酶仍有爭(zhēng)議。比如，在Cd(鎘)脅迫條件下，GSH1可能不再是GSH合成的限制性酶，因?yàn)镃d脅迫會(huì)消耗植物體內(nèi)的GSH，GSH對(duì)GSH1的反饋抑制被解除。 本文以釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因組DNA為模板，通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得了谷胱甘肽合成酶基因(gsh2)，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a(+)-gsh2，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中，并且對(duì)該載體在大腸桿菌中