唐古特白刺活性成分對(duì)胰島素抵抗脂肪細(xì)胞糖脂代謝的影響及機(jī)制研究.pdf

1、白刺是蒺藜科、白刺屬、落葉灌木，它是一種傳統(tǒng)的中藥材。現(xiàn)代的藥理研究表明白刺的果實(shí)和種子具有降血糖的作用。白刺的果實(shí)中含有黃酮、酚酸、生物堿和色素等多種成分。本論文利用3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型，從體外研究幾種白刺活性成分對(duì)其糖脂代謝的影響及作用機(jī)制。本文通過(guò)體外培養(yǎng)小鼠前脂肪細(xì)胞（3T3-L1），采用雞尾酒法誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞，油紅O染色觀察形態(tài)變化，檢測(cè)分化細(xì)胞脂滴形成；通過(guò)2-NBDG檢測(cè)八種活性成分對(duì)胰島素抵抗葡萄糖

2、攝取的影響；Western-blotting方法檢測(cè)相關(guān)蛋白P-AMPK、PPARγ、C/EBPα、ap2表達(dá)；免疫熒光檢測(cè)分化細(xì)胞GLUT4蛋白的表達(dá)；通過(guò)RT-PCR檢測(cè)C/EBPα、PPARγ、ap2、P-AMPK、GLUT4 mRNA基因的表達(dá)水平。
　　主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　1、原代培養(yǎng)48 h的脂肪細(xì)胞分散較均勻，胞體呈梭形，細(xì)胞飽滿；在地塞米松（Dexamethasone,DEX）、胰島素（insuli

3、n）、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（3-isobuty l-1-methylxanthine,IBMX）的誘導(dǎo)下，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的脂滴，說(shuō)明模型建立成功。
　　2、MTT比色法測(cè)定細(xì)胞活力并確定八種活性成分的作用濃度。結(jié)果顯示：在具體范圍濃度作用下，作用濃度為10μM作用1 h時(shí)，活性成分對(duì)細(xì)胞存活率影響很小，因此，最終確定活性成分的作用濃度為10μM作用1 h。
　　3、2-NBDG檢測(cè)八種活性成分對(duì)胰島素抵抗葡萄糖攝取的影響

4、結(jié)果表明：與模型組相比RsMTCA、胡蘿卜苷、異鼠李素、尿囊素能提高糖攝取率。
　　4、Western-blotting結(jié)果表明：與成熟脂肪細(xì)胞組相比，胰島素抵抗組細(xì)胞中與糖代謝有關(guān)的蛋白p-AMPK表達(dá)水平和與脂代謝相關(guān)蛋白PPARγ的表達(dá)水平明顯下降，而活性成分組能夠維持較高的蛋白表達(dá)水平。與成熟脂肪細(xì)胞組相比，胰島素抵抗組細(xì)胞中與脂代謝有關(guān)的蛋白C/EBPα蛋白、ap2蛋白表達(dá)水平明顯升高，白刺活性成分組能夠在一定程度上抑制

5、 C/EBPα蛋白、ap2蛋白的表達(dá)。其中，對(duì)于P-AMPK、C/EBPα、PPARγ蛋白表達(dá)效果作用最明顯的是對(duì)豆香酸和RsMTCA，對(duì)于ap2、GLUT4蛋白表達(dá)效果最明顯的是槲皮素和異鼠李素。
　　5、RT-PCR的結(jié)果顯示：白刺活性成分中胡蘿卜苷組和RsMTCA組在PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表達(dá)量中相對(duì)其他組要高，胡蘿卜苷組在GLUT4 mRNA中的相對(duì)表達(dá)量要高。異鼠李素和RsMTCA組在P-AMPK