PCOS胰島素抵抗脂肪細胞因子作用的分子研究.pdf

1、目的:研究多囊卵巢綜合征(polycysticovarysyndrome，PCOS)患者血清多種脂肪細胞因子(adipocytokines)水平與血清性激素及胰島素水平的關(guān)系；研究脂肪細胞因子基因在以脫氫表雄酮(dyhydroepiandrosterone，DHEA)誘導(dǎo)的PCOS模型大鼠脂肪組織中mRNA和蛋白的表達及其與胰島素抵抗(insulinresistance，IR)的關(guān)系；研究脂肪細胞因子的主控基因過氧化物酶體增殖體激活受體

2、γ(peroxisomeproliferater-activatedreceptorγ，PPARγ)在PCOS大鼠模型脂肪組織及卵巢中的表達。旨在探討脂肪細胞因子在PCOSIR發(fā)生機制中的作用。 方法:1.應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢測肥胖PCOS組(26例)和非肥胖PCOS組(20例)、肥胖對照組(25例)和非肥胖對照組(25例)的血清黃體生成素(luteinizinghormone，LH)、卵泡刺激素(folliclestimulati

3、nghormone，F(xiàn)SH)、睪酮(testosterone，T)的水平；應(yīng)用己糖激酶終點法測定空腹血糖(fastingplasmaglucose，F(xiàn)PG)；應(yīng)用時間分辨免疫分析法測定空腹血清胰島素(fastinginsulin，F(xiàn)IN)；應(yīng)用ELISA法測定血清TNF-α、脂聯(lián)素(adiponectin)、抵抗素(resistin)水平；應(yīng)用穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗(Homeostasismodelassessment-IR，HOMA-IR

4、)指數(shù)計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，以分析各脂肪細胞因子與IR的關(guān)系。2.應(yīng)用脫氫表雄酮DHEA誘導(dǎo)未成年雌性SD(Sprague-Dawley)大鼠構(gòu)建PCOS動物模型；應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法測定大鼠PCOS組(19例)、對照組(19例)性激素水平；應(yīng)用放射免疫(RIA)法測定大鼠血胰島素水平；應(yīng)用京都血糖自動分析儀(GT-1640)測定血糖水平；應(yīng)用光鏡、電鏡檢查觀察PCOS組和對照組卵巢形態(tài)學(xué)的變化。3.應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(r

5、eversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR)法檢測PCOS組和對照組大鼠脂肪組織中TNF-α、脂聯(lián)素、抵抗素、PPARγmRNA的表達，并進行半定量分析。4.應(yīng)用Westernblot技術(shù)檢測PCOS組和對照組大鼠脂肪組織中TNF-α、脂聯(lián)素、抵抗素、PPARγ蛋白質(zhì)的表達，并進行半定量分析。5.應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測PCOS組和對照組大鼠卵巢和脂肪組織中PPARγ的分布和表達

6、。 結(jié)果:1.PCOS肥胖組和PCOS非肥胖組患者血清LH水平及LH/FSH比值均顯著高于其對照組(P＜0.001)；PCOS非肥胖組的LH水平和LH/FSH比值較PCOS肥胖組升高更顯著(P＜0.01和P＜0.001)；血清T的水平在PCOS兩組均顯著高于對照組(P＜0.001)；PCOS肥胖組和PCOS非肥胖組FIN和HOMA-IR均顯著高于相應(yīng)對照組(P＜0.001)；PCOS肥胖組和PCOS非肥胖組TNF-α和抵抗素均顯

7、著高于其對照組，而脂聯(lián)素顯著低于相應(yīng)的對照組(P＜0.001)；PCOS非肥胖組的TNF-α和抵抗素高于、脂聯(lián)素低于肥胖對照組，差異具有顯著性(P＜0.05)；相關(guān)分析表明，PCOS組TNF-α、抵抗素與FIN、HOMA-IR、LH、LH/FSH呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，而脂聯(lián)素與FIN、HOMA-IR、LH、LH/FSH呈顯著負相關(guān)(P＜0.05)。2.PCOS組大鼠卵巢重量為0.032±0.007g/卵巢，顯著高于對照組0.02

8、9±0.008g/卵巢(P＜0.05)；光鏡下見PCOS組卵巢囊性擴張的卵泡增多，顆粒細胞層數(shù)減少至2～3層，且黃體形成比例明顯低于對照組；電鏡下見PCOS組靠卵泡壁的顆粒細胞呈柱狀排列，卵泡腔內(nèi)顆粒細胞和間質(zhì)細胞胞漿內(nèi)有豐富的滑面內(nèi)織網(wǎng)、線粒體和大量脂滴。3.PCOS組大鼠血清T濃度非常顯著地高于對照組(P＜0.001)；血清E2濃度顯著高于對照組(P＜0.05)；PCOS組空腹血糖明顯高于對照組(P＜0.001)，實驗組空腹及服糖后

9、2h血胰島素水平顯著高于對照組(P＜0.05)，空腹血胰島素與血糖比值(INS/GC)非常顯著高于對照組(P＜0.001)，服糖后2hINS/GC顯著高于對照組(P＜0.05)。4.RT-PCR法檢測結(jié)果顯示：PCOS組大鼠脂肪組織中TNF-α、抵抗素mRNA的表達顯著高于對照組(P＜0.05)，而脂聯(lián)素和PPARγ的mRNA表達顯著低于對照組(P＜0.05)。5.Westernblot檢測結(jié)果顯示：PCOS組大鼠脂肪組織中TNF-α、

10、抵抗素蛋白表達顯著高于對照組(P＜0.05)，而脂聯(lián)素、PPARγ的蛋白表達顯著低于對照組(P＜0.05)。6.免疫組化技術(shù)檢測顯示：PPARγ主要在脂肪組織的細胞核中表達，呈棕黃色顆粒狀表現(xiàn)，PCOS組大鼠脂肪組織中PPARγ的表達少于對照組，對照組脂肪組織中PPARγ呈強陽性表達，差異具有顯著性意義(P＜0.05)；PPARγ在卵巢組織中呈弱陽性表達，且PCOS組和對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論:1.PCOS

11、患者血清脂肪細胞因子水平與IR密切相關(guān)，是影響PCOS發(fā)病的重要因素。2.以DHEA誘導(dǎo)未成年雌性SD大鼠構(gòu)建的PCOS動物模型是研究PCOS較為理想的動物模型。3.PCOS大鼠脂肪細胞因子基因及蛋白表達水平均發(fā)生變化，說明脂肪細胞因子基因的變化可能與PCOSIR緊密相關(guān)。4.PCOS大鼠脂肪組織中PPARγ含量減少，而卵巢組織含量沒有變化，說明脂肪細胞因子含量的變化與卵巢組織無關(guān)，而與脂肪組織中主控基因PPARγ的變化有關(guān)，從而進一步